鋅指蛋白439在肝細(xì)胞性肝癌生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　本課題旨在探究鋅指蛋白439(zinc finger protein439，ZNF439)在肝細(xì)胞性肝癌及其癌旁組織中的表達(dá)情況，初步探究其在肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。在人肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞株中過(guò)表達(dá)ZNF439，通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)探究ZNF439對(duì)肝細(xì)胞性肝癌生長(zhǎng)增殖及遷徙轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　方法：
　　運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)21例臨床病理確診的肝細(xì)胞性肝癌及其癌旁相對(duì)正常肝組織芯片標(biāo)本，觀察ZNF

2、439在肝細(xì)胞性肝癌及其癌旁相對(duì)正常肝組織中的表達(dá)情況，同時(shí)比較ZNF439在二者中的表達(dá)差異。應(yīng)用G418抗性篩選，在人肝癌細(xì)胞株Hep-3b及LM3中構(gòu)建ZNF439過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。通過(guò)MTS法細(xì)胞生長(zhǎng)增殖實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)ZNF439過(guò)表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響;通過(guò)transwell小室細(xì)胞遷徙實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞骨架熒光染色實(shí)驗(yàn)以及體外血管生成實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)ZNF439過(guò)表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞遷徙轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　結(jié)果：

3、>　　在免疫組化實(shí)驗(yàn)中，ZNF439只在肝細(xì)胞核中表達(dá)，細(xì)胞漿中不表達(dá)。肝細(xì)胞性肝癌組織細(xì)胞核中，ZNF439主要呈陰性及弱陽(yáng)性表達(dá)，分別占總病例數(shù)的66.7％和28.6％，其次為中等陽(yáng)性表達(dá)，占總病例數(shù)的4.7％;而在癌旁肝臟組織細(xì)胞核中，ZNF439絕大多數(shù)呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性及中等陽(yáng)性表達(dá)，分別占總病例數(shù)的38.1％和28.6％，其次為弱陽(yáng)性表達(dá)，占總病例數(shù)的33.3％。通過(guò)卡方檢驗(yàn)，兩組之間質(zhì)檢存在顯著性差異(P＜0.0001)。應(yīng)用G4

4、18抗性篩選，成功在人肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞株Hep-3b及LM3中構(gòu)建了ZNF439過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。并通過(guò)半定量RT-PCR和蛋白印跡免疫(Western Blot)方法進(jìn)行了驗(yàn)證。MTS法細(xì)胞生長(zhǎng)增殖實(shí)驗(yàn)表明，ZNF439過(guò)表達(dá)不影響Hep-3b及LM3人肝癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)增殖能力。通過(guò)transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)表明，ZNF439過(guò)表達(dá)后肝癌細(xì)胞Hep-3b及LM3的遷徙轉(zhuǎn)移能力受到明顯抑制。細(xì)胞骨架熒光染色實(shí)驗(yàn)顯示，ZNF439基

5、因過(guò)表達(dá)后Hep-3b及LM3細(xì)胞的環(huán)形骨架增多，極性減少，形態(tài)改變被抑制。體外血管生成實(shí)驗(yàn)表明，在LM3細(xì)胞中，ZNF439基因過(guò)表達(dá)后其微血管生成能力受抑制。然而在ZNF439過(guò)表達(dá)和空載的Hep-3b細(xì)胞株中，均未觀察到微血管形態(tài)生成現(xiàn)象。
　　結(jié)論：
　　ZNF439在肝細(xì)胞性肝癌組織及其癌旁肝臟組織中存在差異表達(dá)，提示ZNF439可能參與到肝細(xì)胞性肝癌的發(fā)生過(guò)程中。ZNF439不影響肝細(xì)胞性肝癌的生長(zhǎng)增殖，但ZNF