miRNA-133a在泡球蚴感染所致肝星狀細(xì)胞活化中作用及與肝纖維化的關(guān)系.pdf

1、目的：探討miR-133a在泡球蚴蛋白共培養(yǎng)所致肝星狀細(xì)胞活化及泡球蚴感染所致小鼠肝纖維化中的作用。 方法：建立肉眼直視下肝臟門靜脈接種泡球蚴感染小鼠肝臟模型，對照組注射生理鹽水。造模后1月，3月取肝組織，H&E染色檢測泡球蚴感染情況，天狼猩紅染色檢測膠原合成情況，免疫組化檢測α-SMA在肝組織中的表達(dá)情況。qRT-PCR檢測COL1A1、α-SMA和miRNA-133a的表達(dá)情況。泡球蚴蛋白（60μg/ml，600μg/ml）體

2、外與肝星狀細(xì)胞共培養(yǎng)24h后，qRT-PCR檢測肝星狀細(xì)胞中 COL1A1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad4、TGFβ-RI、TGFβ-RII和miRNA-133a基因表達(dá)水平。Weston-blot檢測肝星狀細(xì)胞中COL1A1和α-SMA蛋白表達(dá)水平。LX-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-133a mimics后檢測LX-2細(xì)胞中COL1A1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad4和miR-133a基因表達(dá)水平。Westo

3、n-blot檢測COL1A1和α-SMA蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：（1）成功建立肉眼直視下肝臟門靜脈接種泡球蚴感染小鼠模型，泡球蚴感染1月和3月后，小鼠病灶旁肝臟中α-SMA和I型膠原mRNA及蛋白表達(dá)水平較假手術(shù)組顯著升高，具統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。泡球蚴感染1月小鼠病灶近旁肝臟中 miRNA-133a表達(dá)水平較假手術(shù)組顯著升高，具統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。（2）泡球蚴蛋白可刺激肝星狀細(xì)胞α-SMA和COL1A1 mRNA

4、水平及蛋白水平的顯著升高（P<0.0001），同時miRNA-133a表達(dá)顯著升高（P<0.0001）。泡球蚴蛋白刺激miRNA-133a模擬物轉(zhuǎn)染LX-2細(xì)胞，α-SMA、COL1A1、Smad2、Smad3和Smad4 mRNA及蛋白表達(dá)水平均較未轉(zhuǎn)染miRNA-133a模擬物L(fēng)X-2細(xì)胞顯著升高（P<0.05），提示miRNA-133a可促進(jìn)泡球蚴誘發(fā)的肝星狀細(xì)胞活化并影響TGF-β/Smad信號通路中的關(guān)鍵蛋白。
　　結(jié)論