SiRNA沉默XIAP基因?qū)侨饬鯩G-63細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的:骨肉瘤是一種臨床常見的好發(fā)于青少年的成骨性惡性腫瘤，它惡性程度高，預(yù)后比較差。隨著化學(xué)療法、手術(shù)技術(shù)、骨重建等方法的進(jìn)展，5年總生存率明顯提高。阿霉素(adriamycin，ADM)、順鉑(diamminedichloroplantinum，DDP)是抗骨肉瘤的最有效藥物，但腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性是影響化療療效的主要原因。許多化療藥物通過誘導(dǎo)凋亡抗腫瘤生長(zhǎng)。XIAP是凋亡調(diào)節(jié)因子家族中對(duì)凋亡調(diào)節(jié)作用最強(qiáng)的分子之一，同時(shí)是唯一

2、的caspases抑制劑。研究顯示它在多種惡性腫瘤中上調(diào)表達(dá)，并與腫瘤化療耐藥及預(yù)后差緊密相關(guān)。RNAi是近年來發(fā)展起來的新技術(shù)，siRNA已經(jīng)成為繼反義核酸、核酶之后基因治療的又一新武器。為此，我們合成特異性干擾XIAP基因的siRNA，并在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG-63細(xì)胞，觀察其對(duì)骨肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制以及細(xì)胞侵襲性的影響，以及對(duì)骨肉瘤MG-63細(xì)胞ADM藥物敏感性及耐藥性的影響，從而為新的骨肉瘤的治療方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　

3、方法:
　　1根據(jù)XIAP基因已知序列化學(xué)合成1條含21-23個(gè)堿基的siRNA(XIAP-siRNA)及陰性對(duì)照(siRNA-neg);用化學(xué)合成的XIAP-siRNA轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG-63細(xì)胞，通過RT-PCR方法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后MG-63細(xì)胞XIAP-mRNA和蛋白水平的表達(dá)情況，進(jìn)一步觀察轉(zhuǎn)染前后骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖抑制的改變，流式細(xì)胞術(shù)和MTT法進(jìn)一步檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后MG-63細(xì)胞的凋亡及ADM對(duì)轉(zhuǎn)染前后骨肉瘤MG

4、-63細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)，觀察化學(xué)合成的特異性XIAP-siRNA對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖抑制的影響以及對(duì)骨肉瘤MG-63細(xì)胞ADM藥物敏感性的影響。
　　2統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　采用SPSS13.0進(jìn)行分析處理，采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，如多組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，以P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1 XIAP-siRNA對(duì)骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖有抑制作用，使細(xì)胞周期阻滯發(fā)生在細(xì)胞周期的G

5、0/1期，并能誘導(dǎo)凋亡。
　　2 XIAP-siRNA降低了XIAP mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　3 XIAP-siRNA聯(lián)合ADM作用的細(xì)胞抑制率達(dá)（63.1±2.1）％，流式細(xì)胞儀分析顯示XIAP-siRNA組細(xì)胞的凋亡率明顯高于轉(zhuǎn)染非特異性siRNA組、空載組及未轉(zhuǎn)染組。
　　結(jié)論:
　　1特異性的化學(xué)合成XIAP-siRNA能夠下調(diào)骨肉瘤MG-63細(xì)胞XIAP基因和蛋白表達(dá)，阻滯細(xì)胞周期于G0/1期和