miRNA-222對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞株OSCC-15生物學(xué)功能影響的研究.pdf

1、目的：口腔鱗癌（oral squamous cell carcinomas OSCC）是口腔頜面部常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率約占口腔頜面部惡性腫瘤的80％以上[1]，且呈逐年不斷上升的趨勢。目前臨床上口腔鱗癌的治療方法主要包括手術(shù)切除、放療、化療、生物治療等，但療效不佳，預(yù)后較差。因此，探索口腔鱗癌新的治療方法對(duì)口腔鱗癌患者的預(yù)后有十分重要的意義。Ambros等[2]于1993年在線蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)第一個(gè)microRNA(miRNA)，即li

2、ne-4，其參與調(diào)節(jié)了線蟲的發(fā)育進(jìn)程。Calin等[3]于2002年最先報(bào)道了 miRNA在腫瘤發(fā)生中的作用。此后不斷有研究證明 miRNA在腫瘤細(xì)胞增殖、分化、凋亡過程中起到了十分重要的作用。因此，miRNA成為腫瘤診治新的研究方向。miRNA-222是 miRNA家族中重要的一員，研究發(fā)現(xiàn)， miRNA-222在多種腫瘤中表達(dá)異常，且miRNA-222的異常表達(dá)影響到腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡及遷移等生物學(xué)功能。龐新亞等[4]發(fā)現(xiàn)miRN

3、A-221、miRNA-222在肝癌組織中表達(dá)上調(diào)；陶宣辰等[5]在HepG2肝癌細(xì)胞系體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，上調(diào)miRNA-222的表達(dá)時(shí)，PTEN表達(dá)受到抑制，HepG2細(xì)胞的增殖和侵襲能力增強(qiáng)。Gillies和LorimerL[6]在腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，miRNA-221／222可以與p27kipl mRNA的3'-UTR結(jié)合，降低p27kipl的表達(dá)。當(dāng)下調(diào)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中 miRNA-221／222的表達(dá)時(shí)， p27kipl的蛋

4、白表達(dá)量上調(diào)，明顯地將腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤 U251細(xì)胞株阻滯在 G1期，降低膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞U251的增殖。本實(shí)驗(yàn)通過研究 miRNA-222對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞株 OSCC-15增殖、凋亡及遷移等生物學(xué)功能的影響，探討miRNA-222在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為口腔鱗癌的早期診斷、治療及預(yù)后提供參考依據(jù)。
　　方法：
　　1.口腔鱗癌細(xì)胞株OSCC-15的復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存。
　　2.將人工合成的miRNA-222抑制物（

5、inhibitor）及miRNA-222模擬物（mimics）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染口腔鱗癌細(xì)胞株OSCC-15，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組。
　　3.MTS試劑盒分別于0h、24h、48h、72h處理各組細(xì)胞，酶標(biāo)儀檢測miRNA-222 inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對(duì)照組三組細(xì)胞的吸光度值，并繪制細(xì)胞增殖曲線。
　　4.應(yīng)用Annexin V/PI雙染試劑盒處理各組細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)分別檢測miRNA-222

6、inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對(duì)照組三組細(xì)胞凋亡率。
　　5.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測miRNA-222 inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對(duì)照組三組細(xì)胞遷移率。
　　6.結(jié)果判定及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　應(yīng)用 SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，口腔鱗癌細(xì)胞株OSCC-15細(xì)胞的吸光度值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，采用完全隨機(jī)的兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較各組細(xì)胞吸光度值的差

7、異，采用χ2檢驗(yàn)比較各組細(xì)胞凋亡率的差異，采用完全隨機(jī)的兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較各組遷移率間的差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.miRNA-222對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞株OSCC-15吸光度和增殖率的影響
　　1.1.0h時(shí)，空白對(duì)照組的吸光度值為1.318±0.061， miRNA-222 inhibitor組的吸光度值為1.141±0.040，miRNA-222 inhibitor組較空白對(duì)照組降低，

8、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；miRNA-222 mimics組的吸光度值為1.594±0.138，miRNA-222 mimics組較空白對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　1.2.24h時(shí)，空白對(duì)照組的吸光度值為2.128±0.150， miRNA-222 inhibitor組的吸光度值為1.733±0.130，miRNA-222 inhibitor組較空白對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；mi

9、RNA-222 mimics組的吸光度值為2.752±0.106，miRNA-222 mimics組較空白對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　1.3.48h時(shí)，空白對(duì)照組的吸光度值為2.426±0.124， miRNA-222 inhibitor組的吸光度值為2.155±0.057，miRNA-222 inhibitor組較空白對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；miRNA-222 mimics組的吸光度

10、值為2.791±0.125，miRNA-222 mimics組較空白對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　1.4.72h時(shí)，空白對(duì)照組的吸光度值為2.806±0.163， miRNA-222inhibitor組的吸光度值為2.423±0.053，miRNA-222 inhibitor組較空白對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；miRNA-222 mimics組的吸光度值為3.369±0.409，miRNA-

11、222 mimics組較空白對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　1.5.miRNA-222 inhibitor組0h、24h、48h、72h的增殖率分別是85.57%、81.44%、88.83%、86.35%，低于空白對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；miRNA-222 mimics組0h、24h、48h、72h的增殖率分別是120.94%、129.32%、115.04%、163.54%，高于空白對(duì)照組，

12、但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.miRNA-222對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞株OSCC-15凋亡的影響
　　miRNA-222 inhibitor組的細(xì)胞凋亡率為9.58%，高于空白對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率6.11%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；miRNA-222 mimics組的細(xì)胞凋亡率為2.25%，低于空白對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率6.11%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　3.miRNA-222對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞

13、株OSCC-15遷移的影響
　　24h，48h，72h，miRNA-222 inhibitor組的遷移率分別是17.9%、19.4%、20.6%，空白對(duì)照組的遷移率分別是23.7%、29.4%、36.4%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。miRNA-222 mimics組的遷移率分別是47.9%、67.8%、78.9%，miRNA-222 mimics組與空白對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：miR