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文檔簡介
1、目的:
觀察 Apelin-13對谷氨酸誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的影響,從ERK1/2信號(hào)通路的角度探討 Apelin-13對谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)興奮性損傷的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
方法:
建立谷氨酸損傷PC12細(xì)胞的模型,給予不同谷氨酸濃度(5、10、20mmol/L),找到最佳損傷濃度;給予不同 Apelin-13濃度(10、100nmol/l;1、10)μmol/L)找到最佳保護(hù)濃度;后加入U(xiǎn)0126(ER
2、K1/2抑制劑)將實(shí)驗(yàn)分成5組:Control、Glu、Glu+Apelin-13、Glu+Apelin-13+U0126、U0126,預(yù)先給予U0126培養(yǎng)30 min,后加入Apelin-13及 Glu共同培養(yǎng)。用 MTT比色法檢測細(xì)胞存活率;用Annexin V/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測PC12細(xì)胞凋亡率;用Western Blot檢測細(xì)胞p-ERK1/2蛋白表達(dá)。
結(jié)果:
1、谷氨酸誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷
3、谷氨酸(5,10和20 mmol/L)處理24 h可濃度依賴性地降低PC12細(xì)胞的存活率,升高細(xì)胞的調(diào)亡率,下調(diào)p-ERK1/2蛋白的表達(dá)水平。
2、Apelin-13對谷氨酸誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用Apelin(1μmol/L)的與谷氨酸(10 mmol/L)共同處理 PC12細(xì)胞24 h后,細(xì)胞的存活率顯著提高,細(xì)胞凋亡率顯著降低。
3、ERK信號(hào)通路抑制劑U0126拮抗Apelin-13對谷氨酸誘導(dǎo)PC1
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