人胚胎肌肉組織來源的隨機惡性轉(zhuǎn)化細胞系的生物學特性.pdf

1、第一部分:
　　背景與目的:
　　非整倍體是癌細胞的最大遺傳特征,非整倍體是指細胞核內(nèi)染色體數(shù)目出現(xiàn)異常。100多年前就有人提出非整倍體是癌癥的起因假說,近來越來越多的研究證實這種假說成立的可能性。但非整倍體作為獨立因素能否導致腫瘤的發(fā)生,目前還沒有確切的結(jié)論。本實驗用人胚胎肌肉細胞進行培養(yǎng),通過聚乙二醇融合肌肉細胞,以期獲得非整倍體細胞,由于聚乙二醇是非致突變物質(zhì),在融合過程中不會有基因突變的產(chǎn)生,排除了基因突變的作用,通

2、過此方法獲得非整倍體細胞,進一步分析產(chǎn)生的非整倍體細胞能否形成腫瘤,從而對腫瘤產(chǎn)生的誘因-非整倍體學說進行深入研究。
　　材料和方法:
　　用人胚胎肌肉細胞進行培養(yǎng),50％聚乙二醇進行細胞融合,觀察能否產(chǎn)生非整倍體細胞;利用3-甲基膽蒽(MCA)和秋水仙素(colcemid)聯(lián)合處理人胚胎肌肉細胞,產(chǎn)生的非整倍體細胞作為陽性對照;未進行任何處理的肌肉細胞作為陰性對照,通過染色體分析和流式細胞儀分析檢測非整倍體細胞。對非整倍體

3、細胞進行長期培養(yǎng),觀察細胞能否惡性轉(zhuǎn)化形成腫瘤。
　　結(jié)果:
　　通過流式細胞儀分析發(fā)現(xiàn),通過細胞融合及 MCA和秋水仙素(colcemid)處理均產(chǎn)生非整倍體細胞,染色體分析發(fā)現(xiàn)這些細胞染色體數(shù)目是異常的,產(chǎn)生的非整倍體細胞以亞二倍體為主,少量細胞為超二倍體;而且部分非整倍體細胞短期培養(yǎng)可以增殖,其中一次融合永生化,但均未發(fā)生惡變。
　　結(jié)論:
　　聚乙二醇對人胚胎肌肉正常二倍體細胞融合,能夠產(chǎn)生非整倍體細胞。

4、長期培養(yǎng),未發(fā)現(xiàn)細胞的惡性轉(zhuǎn)化。
　　第二部分:
　　背景和目的：
　　本實驗室通過人胚胎肌肉細胞的培養(yǎng),獲得自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化為肉瘤細胞系,分別命名MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5。本實驗對這種自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化細胞系的染色體變化進行研究,揭示這種肉瘤細胞系的染色體變化特點。
　　材料和方法:
　　染色體分析轉(zhuǎn)化肉瘤細胞系MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的變化特點。

5、通過流式細胞儀分析進行染色體倍體研究。
　　結(jié)果:
　　肉瘤細胞系幾乎所有的細胞核型都存在染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的異常,染色體數(shù)目大多在46條以上,結(jié)構(gòu)異常包括環(huán)形染色體、線形染色體、雙著絲粒染色體和廣泛的易位。流式細胞儀分析肉瘤細胞系全部是非整倍體。
　　結(jié)論:
　　MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5肉瘤細胞系是非整倍體細胞,染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)存在大范圍的異常。
　　第三部分:
　　目的:

6、
　　觀察苦參堿(matrine)對體外培養(yǎng)的人肉瘤細胞系MS0812細胞的增殖和誘導調(diào)亡作用。
　　方法:
　　苦參堿處理人肉瘤細胞系 MS0812后,應用 MTT比色法檢測不同濃度苦參堿和不同作用時間對MS0812細胞的增殖作用的影響,DNA凝膠電泳、TUNEL法和流式細胞儀檢測細胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　苦參堿對MS0812細胞增殖具有抑制作用,其增殖抑制作用隨作用時間延長及藥物濃度升高更加明顯,具有