p66shcA基因?qū)C12細胞周期的影響.pdf

1、Shc家族有3個成員：ShcA，ShcB，ShcC。ShcA是其中最早發(fā)現(xiàn)的分子，在1992年被發(fā)現(xiàn)作為受體蛋白偶聯(lián)到被激活的表皮生長因子受體EGFR上參與有絲分裂原活化的蛋白激酶MAPK通路，該基因只在神經(jīng)干細胞和神經(jīng)前體細胞中表達，但在成年個體中除中樞神經(jīng)系統(tǒng)外在機體周身表達，ShcB/ShcC只限在成年個體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達。ShcA編碼3個分子量相近的蛋白52kDa(p52ShcA)、46kDa(p46ShcA)和66kDa(

2、p66ShcA)，它們都具有Shc家族特有的高度保守結構域，即C段Src同源結構域SH2，N段的磷酸酪氨酸結合結構域PTB，和膠原同源區(qū)CH1。p52ShcA/p46ShcA共用一個啟動子，可以偶聯(lián)到被激活的受體酪氨酸蛋白激酶RPTK，參與Ras/MAPK通路調(diào)節(jié)細胞的增殖。p66ShcA是ShcA最長的剪接體，具有特有的N段結構域，稱作CH2，在36位包含一個磷酸蘇氨酸位點，該位點是一個潛在的磷酸化位點，影響p66ShcA基因的功能。

3、 為了研究p66shcA基因如何在神經(jīng)發(fā)育分化過程中啟作用，我們以PC12為實驗模型，以脂質(zhì)體法將pEGFP-N1-shcA真核表達載體瞬時轉(zhuǎn)染PC12細胞，流式細胞儀觀察細胞周期分布的變化；RT-PCR檢測p27mRNA的表達變化。流式細胞檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組和空載體組相比，轉(zhuǎn)染mp66shcA后，處于G0/G1期的PC12細胞百分比明顯升高(P<0.01)，而G2/M期的細胞百分比明顯降低(P<0.01)；在mRNA水平上，

4、轉(zhuǎn)染：mp6shcA的p27的表達明顯升高(P<0.01)。以上結果表明，mp66shcA基因影響神經(jīng)元前體細胞的增殖。 為了確定p66shcA基因在NGF誘導PC12細胞分化過程中是否啟促進作用。我們用G418篩選轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定克隆，比較在NGF作用下實驗組與對照組分化程度的快慢。由于該基因有誘導凋亡的作用，無法得到穩(wěn)定克隆，但在NGF誘導兩天的條件下，過表達目的基因的PC12細胞，與對照組細胞相比，確有明顯分化的細胞形態(tài)出現(xiàn)，