MEK-ERK抑制劑U0126對人舌鱗癌Tca8113細胞增殖、遷移及侵襲的影響.pdf

1、目的:探討U0126對人舌鱗癌Tca8113細胞的增殖、遷移和侵襲的影響及其機制。
　　方法:將不同濃度MEK/ERK抑制劑U0126（25、50、100μmol/L）處理Tca8113細胞24h、48h、72h后，MTT法檢測其對細胞增殖的抑制情況;劃痕實驗和Transwell實驗檢測其對細胞遷移和侵襲能力的影響;細胞免疫熒光染色和Western blot法檢測細胞中ERK1/2、p-ERK1/2、MEKK1、p-MEKK1在細

2、胞內(nèi)定位及蛋白的表達;Western blot法檢測細胞中上皮-間質轉化相關蛋白E-cadherin及vimentin的表達。
　　結果:1.MTT檢測結果示，25、50和100μmol/L U0126刺激細胞24、48、72h后，與對照組比較對細胞增殖均具有明顯的抑制作用（P＜0.01或P＜0.05）;U0126作用細胞24、48和72h時，50和100μmol/L組與25μmol/L組比較對細胞增殖均具有明顯的抑制（P＜0.0

3、1或P＜0.05）;U0126處理細胞24、48和72h時，100μmol/L組與50μmol/L組比較對細胞增殖的抑制顯著（P＜0.01）;表現(xiàn)出濃度依賴性。25、50和100μmol/L U0126刺激細胞后，48和72h組與24h組比較對細胞增殖具有明顯的抑制（P＜0.01）;72h與48h組比較對細胞增殖的抑制作用顯著(P＜0.01);表現(xiàn)出的時間依賴性。
　　2.劃痕實驗結果示，25、50、100μmol/LU0126刺

4、激Tca8113細胞24、48、72h后，細胞向劃痕內(nèi)遷移的距離與對照組比較受到明顯抑制（P＜0.01）。
　　3.Transwell檢測結果顯示，25、50、100μmol/LU0126處理Tca8113細胞48h后，與對照組比較，自上室侵襲穿過基質膠進入下室的細胞數(shù)目減少，相對侵襲率分別為79％、51％、35％(P＜0.01)，表現(xiàn)出濃度依賴性。
　　4.免疫熒光檢測顯示，MEKK1主要定位在細胞質，p-MEKK1主要定

5、位于細胞質和細胞核膜，ERK1/2定位在細胞質和核膜，p-ERK1/2主要定位在細胞核膜和核內(nèi);25、50、100μmol/LU0126處理Tca8113細胞48h后，隨著藥物濃度的增加，進入細胞核內(nèi)p-ERK1/2的熒光密度逐漸降低，呈現(xiàn)出濃度依賴性，而ERK1/2、p-MEKK1、MEKK1的熒光密度沒有明顯變化。
　　5.Western blot實驗顯示:25、50、100μmol/LU0126處理Tca8113細胞48h后

6、，與對照組比較，U0126對p-ERK1/2蛋白表達明顯抑制(P＜0.01);而對ERK1/2、p-MEKK1、MEKK1蛋白表達沒有明顯抑制作用。
　　6.Western blot實驗顯示:25、50、100μmol/LU0126處理Tca8113細胞48h后，與對照組比較E-cadherin蛋白表達明顯增強(P＜0.01)，而Vimentin蛋白表達明顯減弱(P＜0.01)，均呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　結論:1.U0126明