Il-35在乳腺癌浸潤淋巴細胞中表達的臨床意義及其對乳腺癌細胞生物學功能的影響.pdf

1、機體的免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)同惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。2002年Schreiber和Dunn在腫瘤免疫監(jiān)視理論的基礎(chǔ)上提出了腫瘤免疫編輯學說(cancer immunoediting)，認為免疫系統(tǒng)除了可以識別并清除腫瘤細胞，還具有免疫重塑功能，即對腫瘤細胞進行免疫選擇，使免疫原性弱的腫瘤細胞進入免疫逃逸階段，最終實現(xiàn)腫瘤進展。調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)是免疫抑制中的重要一環(huán)，可以誘導腫瘤細胞通過免疫逃逸逃避效應(yīng)細胞的識別和殺傷，促進腫瘤的

2、發(fā)生發(fā)展。IL-35是2007年由Collison等和Niedbala等兩個研究小組近乎同時發(fā)現(xiàn)的新型細胞因子，由IL-12的α亞基IL-12p35和IL-27的β亞基EBI3以異二聚體形式組成。IL-35是主要來源于調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)的抑制性細胞因子，它不僅可以直接促進Treg分化、增殖和發(fā)揮最大免疫調(diào)節(jié)作用，還可以誘導產(chǎn)生新型iTR35細胞，從而級聯(lián)放大機體的免疫抑制調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，是促進腫瘤免疫逃逸的重要因素。新近的研究證明，除了

3、調(diào)節(jié)性T細胞外，調(diào)節(jié)性B細胞、部分腫瘤細胞均可表達IL-35，提示IL-35同腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。在胰腺癌、直腸癌等腫瘤的研究中，可檢測到IL-35的表達，并且IL-35的高表達同不良的臨床病理因素相關(guān)。
　　第一部分 IL-35在乳腺癌浸潤淋巴細胞和血漿中的表達及其臨床意義
　　目的：
　　明確IL-35在乳腺癌患者中的表達情況，分析IL-35高表達與各臨床病理因素之間的相關(guān)性，評估IL-35表達與患者預(yù)后轉(zhuǎn)歸

4、的關(guān)聯(lián)及能否作為乳腺癌新的生物標記物。
　　方法：
　　入組2008年01月至2010年05月行手術(shù)切除的、具有完整隨訪資料的女性乳腺癌患者110例，應(yīng)用免疫組織化學方法檢測乳腺癌組織中IL-35表達情況，探討IL-35表達同乳腺癌TNM分期、ER、PR、HER-2表達及無進展生存期(PFS)、總生存期(OS)的關(guān)系。
　　入組2014年03月至2014年12月確診的乳腺癌患者60例及健康對照30例，應(yīng)用ELISA方法

5、檢測乳腺癌患者血漿中IL-35表達情況，探討IL-35表達同乳腺癌TNM分期、ER、PR、HER-2、p53、EGFR、Ki67及分級的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　在乳腺癌組織浸潤淋巴細胞中發(fā)現(xiàn)IL-35表達，110例乳腺浸潤性導管癌患者中，IL-35高表達者19例，占17.3％，低表達者48例，占43.6％，不表達者43例，占39.1％，IL-35在腫瘤浸潤淋巴細胞中的表達水平在年齡大于50歲、術(shù)后病理分期Ⅲ期、腫塊大于2cm

6、及ER陰性患者中顯著升高(p＜0.05)。Kaplan-Meier生存分析顯示，腫瘤浸潤淋巴細胞高表達IL-35的腫瘤患者組PFS和OS較低表達組顯著縮短(p＜0.05)。
　　乳腺癌患者血漿中IL-35水平高于健康對照組，但差別無統(tǒng)計學意義（0.24±0.11 ng/ml vs0.23±0.10ng/ml，P=0.544）。但在乳腺癌患者中，Ⅲ期患者血漿IL-35表達水平顯著高于Ⅰ和Ⅱ期的患者(0.29±0.13ng/ml VS

7、0.22±0.09ng/ml，P=0.024)，腋窩淋巴結(jié)陽性患者的血漿IL-35表達水平顯著高于陰性患者（0.28±0.13 ng/ml VS0.20±0.05ng/ml，P=0.004），但患者血漿IL-35表達水平與ER、PR、HER-2、p53、EGFR、Ki67表達及分級無明顯相關(guān)性(p＞0.05)。
　　結(jié)論乳腺癌組織腫瘤浸潤淋巴細胞中表達IL-35，高表達IL-35同多個預(yù)后不良因素密切相關(guān)，血漿中IL-35表達同臨

8、床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。IL-35表達可以作為乳腺癌的不良預(yù)后因子。
　　第二部分 IL-35對乳腺腫瘤細胞生物學功能的影響及機制
　　目的：
　　探討IL-35對乳腺腫瘤細胞增殖、細胞周期、凋亡的影響及其分子機制。
　　方法：
　　將外源性IL-35加入人乳腺癌細胞系MCF-7進行培養(yǎng)，應(yīng)用MTT法檢測增殖，流式細胞術(shù)檢測細胞周期，比較實驗組和對照組在增殖、凋亡及細胞周期中的差異。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-PCR(

9、RT-PCR)方法檢測實驗組和對照組促增殖相關(guān)分子(cyclin B、cyclin D、cyclin E、cdk2、cdk4)、抑制增殖相關(guān)分子(p15、p18、p21、p27、p53)、促進凋亡相關(guān)分子(Fas、FasL、TRAIL、Bax)、抑制凋亡相關(guān)分子(FLIP、Bcl-2、survivin)的表達水平，比較兩組表達差異。從轉(zhuǎn)錄水平探討IL-35對乳腺癌細胞增殖和凋亡相關(guān)分子的影響。
　　結(jié)果：
　　實驗組增殖率較

10、對照組顯著提高，呈時間和濃度依賴性，提示IL-35在體外有促進乳腺癌細胞增殖的作用。與對照組相比，各實驗組S期細胞的比例升高，濃度為0、2、10、50ng/ml組的S期細胞比例分別為:27.11％，29.17％，32.76％，34.80％，提示隨著IL-35濃度升高，乳腺癌細胞增殖能力增強。
　　與對照組相比，IL-35處理組的細胞增殖相關(guān)分子cyclin E、cdk2水平上調(diào)，抑制增殖相關(guān)分子p15水平下調(diào)，兩組差別有統(tǒng)計學意義

11、(p＜0.05)。IL-35，處理組促進凋亡相關(guān)分子Fas、TRAIL水平下調(diào)(p＜0.05)。其他增殖及凋亡相關(guān)分子(cyclin B、cyclin D、cdk4、p18、p21、p27、p53、FasL、Bax、FLIP、Bcl-2、survivin)水平變化實驗組和對照組無顯著差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　IL-35可以通過調(diào)控促增殖相關(guān)分子cyclin E、cdk2上調(diào)、抑制增殖相關(guān)分子p15下調(diào)、促進凋亡