SP1、KLF4和P21在卵巢漿液性腺癌中的表達及意義的研究.pdf

1、背景：卵巢惡性腫瘤病死率高、預后差，嚴重威脅了女性的生命和健康。其中上皮性惡性腫瘤占85％~90%，卵巢漿液性癌是卵巢上皮性惡性腫瘤中最常見的一種，其預后與臨床期別、病理類型、細胞分化程度、術后殘存癌灶的大小及腫瘤細胞對化療的敏感性有關。卵巢上皮性癌的發(fā)病學說——二元論，已被廣泛接受及認可，根據卵巢癌二元論學說，將漿液性卵巢癌分為I型和II型。I型卵巢癌分化程度高，惡性程度低，主要是來自卵巢交界性腫瘤和子宮內膜異位，鏡下常見良性-交界性

2、-癌的過渡，主要包括：低級別漿液性癌、低級別子宮內膜癌、透明細胞癌及黏液性癌等。II型卵巢癌，分化程度低，惡性程度高，多來源于輸卵管上皮，易于早期轉移，主要包括：高級別漿液性癌、低分化子宮內膜樣癌、未分化癌及癌肉瘤等。因為卵巢癌的早期診斷對其預后很關鍵，所以目前找到特異的診斷指標或有效的治療方案是治療卵巢癌的首要任務。
　　轉錄因子是一種具有特殊結構的蛋白質分子，能夠行使調控基因表達的功能。SPl/Krüppel樣轉錄因子(Spl

3、-like and Krüppel-like transcription factors, SP1/KLFs)參與了細胞的增殖與分化。SP1是第一個被克隆的Sp/KLF家族中的轉錄因子，在哺乳動物細胞中廣泛表達，目前關于SP1的研究已經有很多，SP1已作為促癌蛋白被大家所熟知，但其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用還未完全清楚，它在漿液性卵巢癌中的表達情況還有待進一步研究。
　　Krüppex樣鋅指轉錄因子(Krüppel-like t

4、ranscription factors, KLFs)是SPl/Kruppel樣轉錄因子家族中的一個亞家族，KLFs對不同基因啟動子的GT盒具有不同的親和力，因此KLFs因子在不同組織中既可作為轉錄激活因子，也可作為轉錄抑制子。KLFs在細胞增殖、分化、調亡中起重要作用。KLF4在人類組織中廣泛表達，其與SP1在鋅指的C-端具有高度同源性，已有研究證實SP1與KLF4在胰腺癌、胃癌中的表達呈負相關，在多數腫瘤細胞中KLF4為抑癌基因，例

5、如宮頸癌，肝癌，皮膚癌等，而在乳腺癌，口腔癌中是癌基因，但其在卵巢癌中的作用還不清楚。
　　P21是P53基因下游靶基因的轉錄產物，是CDKIs（細胞周期素依賴性激酶抑制蛋白）家庭中第一個被發(fā)現的，P21的低表達與許多腫瘤的發(fā)生密切相關。SP1為P21轉錄所必需，SP1對P21的調控很可能與c-Myc有關，從而促進細胞增殖。目前關于P21在卵巢癌中的作用還不十分清楚，有研究表明其作為抑癌基因發(fā)揮作用。
　　本文主要通過研究三

6、者在卵巢不同級別漿液性腺癌中的表達情況，進一步研究卵巢漿液性癌二元論學說，尋找卵巢癌診斷及預后評估指標，為卵巢癌的早期診斷和治療提供更好的理論依據，以提高不同級別卵巢癌患者的生存率。
　　目的：研究SP1、KLF4和P21在卵巢高級別漿液性腺癌、低級別漿液性腺癌、正常輸卵管及正常卵巢組織中的表達情況，分析SP1、KLF4和P21的表達與卵巢癌的病理分級、手術病理分期及預后的關系。分析SP1與KLF4、P21蛋白表達的相關性，進一步

7、探討SP1、KLF4和P21在卵巢漿液性腺癌的發(fā)生、發(fā)展中所發(fā)揮的作用。
　　研究方法：收集2006年1月至2011年1月河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院婦產科進行手術治療的臨床資料完整的、病理證實的卵巢漿液性腺癌標本65例，其中高級別42例，低級別23例，另取正常輸卵管組織15例、正常卵巢組織11例作為對照，根據二元論，低級別腺癌選擇正常卵巢作對照，高級別腺癌起源于輸卵管，選擇輸卵管上皮做對照。采用免疫組織化學（S-P法）檢測卵巢漿液性腺癌

8、中SP1、KLF4和P21蛋白的表達情況。實驗過程嚴格按照免疫組化（S-P法）檢測試劑盒操作步驟進行，陽性對照選擇已知的陽性病理切片，陰性對照選擇磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗。對44例具有完整隨訪記錄的卵巢漿液性腺癌患者進行隨訪，其中低級別漿液性腺癌患者13例，高級別漿液性腺癌患者31例。運用統計分析計算3年及5年生存率，分析SP1、KLF4和P21蛋白的表達以及手術病理分期、病理分級、術后化療方式、術后殘余癌灶大小與患者預后的關系。

9、統計學處理采用SPSS13.0統計軟件，計數數據采用X2檢驗或Fisher確切概率法，SP1、KLF4和P21三個指標之間的相關性分析采用Spearman等級相關。結果以P<0.05為有顯著性差異。
　　結果：
　　1卵巢低級別腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表達情況
　　1.1 SP1蛋白表達結果
　　在正常卵巢組織、低級別腺癌中，SP1蛋白表達的強陽性率分別為9.1%和65.2%，統計結果顯示：低級別腺癌組

10、SP1蛋白表達的強陽性率明顯高于正常卵巢組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　1.2 KLF4蛋白表達的結果
　　在正常卵巢組織、低級別腺癌中，KLF4蛋白表達的強陽性率分別為72.7%和34.8%，統計結果顯示：低級別腺癌組KLF4蛋白表達的強陽性率明顯低于正常卵巢組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　1.3 P21蛋白表達的結果
　　在正常卵巢組織、低級別腺癌中，P21蛋白表達的強陽性率分別為

11、72.7%和26.1%，統計結果顯示：低級別腺癌組P21蛋白表達的強陽性率明顯低于正常卵巢組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　2卵巢高級別腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表達情況
　　2.1 SP1蛋白表達結果
　　在正常輸卵管組織、卵巢高級別漿液性腺癌中，SP1表達的強陽性率分別為6.7%和73.8%，統計結果顯示：高級別腺癌組SP1蛋白表達的強陽性率明顯高于正常輸卵管組，兩者比較有顯著差異（P<0.05

12、）。
　　2.2 KLF4蛋白表達結果
　　在正常輸卵管組織、卵巢高級別漿液性腺癌中，KLF4表達的強陽性率分別為86.7%和16.7%，統計結果顯示：高級別腺癌組KLF4蛋白表達的強陽性率明顯低于正常輸卵管組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　2.3 P21蛋白表達結果
　　在正常輸卵管組織、卵巢高級別漿液性腺癌中，P21蛋白表達的強陽性率分別為66.7%和11.9%，統計結果顯示：高級別腺癌組P21蛋

13、白表達的強陽性率明顯低于正常輸卵管組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　3卵巢不同級別漿液性腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表達的比較
　　3.1卵巢不同級別漿液性腺癌中SP1蛋白表達情況
　　卵巢低級別腺癌組和高級別腺癌組，SP1蛋白的強陽性表達率分別為65.2%和73.8%，統計分析表明，低級別組和高級別組中SP1蛋白的強陽性表達率無顯著差異。（P>0.05）
　　3.2卵巢不同級別漿液性腺癌中KL

14、F4蛋白表達情況卵巢低級別腺癌組和高級別腺癌組，KLF4蛋白的強陽性表達率分別為34.8%和16.7%，統計分析表明，低級別組和高級別組中KLF4蛋白的強陽性表達率無顯著差異。（P>0.05）
　　3.3卵巢不同級別漿液性腺癌中P21蛋白表達情況
　　卵巢低級別腺癌組和高級別腺癌組，P21蛋白的強陽性表達率分別為26.1%和11.9%，統計分析表明，低級別組和高級別組中P21蛋白的強陽性表達率無顯著差異。（P>0.05）

15、r>　　4 SP1、KLF4和P21蛋白的表達與卵巢不同級別漿液性腺癌患者預后的關系
　　4.1卵巢不同級別漿液性卵巢癌的生存率比較
　　卵巢低級別腺癌組3年和5年生存率分別為：69.2%和30.8%，卵巢高級別腺癌組3年和5年生存率分別為：35.5%和9.7%。統計分析表明，低級別組和高級別組的3年生存率和5年生存率均有顯著差異。（P<0.05）
　　4.2 SP1蛋白的表達與卵巢不同級別漿液性腺癌預后的關系

16、　　在卵巢低級別腺癌組，SP1強陽性組與SP1陰性或弱陽性組相比其3年生存率（42.9%，100.0%）和5年生存率（0.00%，66.7%）差異均有統計學意義（P<0.05）。在卵巢高級別腺癌組，SP1強陽性組與SP1陰性或弱陽性組相比的3年生存率（22.7%，66.7%）和5年生存率（0.00%，33.3%）均有顯著差異（P<0.05）。
　　4.3 KLF4蛋白的表達與卵巢不同級別漿液性腺癌預后的關系
　　在卵巢低級別

17、腺癌組，KLF4強陽性組與KLF4陰性或弱陽性組相比的3年（75.0%，66.7%）和5年生存率（50.0%，22.2%）均無顯著差異（P>0.05）。在卵巢高級別腺癌組，KLF4強陽性組與KLF4陰性或弱陽性組相比的3年（85.7%，20.8%）和5年生存率（42.9%，0.00%）均有顯著差異（P<0.05）。
　　4.4 P21蛋白的表達與卵巢不同級別漿液性腺癌預后的關系
　　在卵巢低級別腺癌組，P21強陽性組與P21

18、陰性或弱陽性組相比的3年（100%，60.0%）和5年生存率（66.7%，20.0%）均無顯著差異（P>0.05）。在卵巢高級別腺癌組，P21強陽性組與 P21陰性或弱陽性組相比的3年（100.0%，25.9%）和5年生存率（50.0%，3.7%）有顯著差異（P<0.05）。5 SP1、KLF4和P21在卵巢不同級別漿液性腺癌中表達的相關性分析
　　在卵巢低級別漿液性腺癌中SP1高表達與KLF4、P21的低表達無顯著相關性（P>0

19、.05），KLF4的低表達與P21的低表達之間差異無統計學意義（P>0.05）；在卵巢高級別漿液性腺癌中SP1與KLF4、P21的表達呈顯著負相關（P<0.05），KLF4與P21的表達呈顯著正相關（P<0.05）。
　　6卵巢不同級別漿液性腺癌的COX多因素生存分析
　　為進一步確定影響卵巢漿液性腺癌的預后因素，將 Kaplan-Meier單因素生存分析篩選出的預后相關因素：SP1的高表達，KLF4的低表達、P21的低表達

20、、手術病理分期、化療方式、術后殘余癌灶大小納入 COX比例風險回歸模型進行多因素生存分析，進入COX多因素回歸分析的因素可以認為是卵巢漿液性癌預后的獨立影響因素。結果顯示：在卵巢低級別漿液性腺癌中，SP1的高表達是影響卵巢低級別漿液性腺癌預后的獨立影響因素（P=0.016）；在卵巢高級別漿液性腺癌中，SP1和臨床病理分期進入COX比例風險回歸模型，二者為影響卵巢高級別漿液性腺癌患者預后的獨立因素（P=0.001，P=0.012）。

21、>　　結論：
　　1在卵巢低級別腺癌和高級別腺癌中，SP1的表達升高，KLF4、P21的表達降低。提示三者參與了卵巢高、低級別漿液性腺癌的發(fā)生。
　　2 SP1、KLF4和P21在卵巢低級別和高級別漿液性腺癌中的表達無明顯差異，說明卵巢低級別和高級別漿液性腺癌的發(fā)生受多因素的調節(jié)，可能存在共同的分子基礎。
　　3 SP1、KLF4和P21在卵巢高級別漿液性腺癌中的表達呈顯著相關，而三者在卵巢低級別漿液性腺癌中的表達無明