膿毒癥患者IL-32的差異及PB1對LPS介導的THP-1源性巨噬細胞炎癥反應的抑制作用.pdf

1、目的:膿毒癥是急診醫(yī)學面臨的重要問題之一，其病情進展快，病死率高，每年發(fā)病率不斷上升，而LPS與TLR4受體通路在其發(fā)病機制中起到重要作用，LPS通過激動TLR4信號轉導，促使單核與巨噬細胞產(chǎn)生大量炎癥介質，對炎癥過度反應，導致膿毒癥發(fā)生發(fā)展?，F(xiàn)有研究表明一種近年來新發(fā)現(xiàn)的細胞因子IL-32與TLR-4受體通路密切相關，可與TNF-α相互刺激分泌，導致炎癥反應加劇。本實驗通過比較膿毒癥患者血清中TNF-α與IL-32的含量關系，并通過細

2、胞造模研究原花青素B1(PB1)與TLR-4受體阻斷劑CLI-095對LPS刺激下THP-1細胞源性巨噬細胞分泌TNF-α與IL-32的作用。探討IL-32在膿毒癥中發(fā)揮的作用及可能的機制。
　　方法:臨床研究:按膿毒癥診斷標準，選取我院急診科2015.05-2016.4期間收治32例膿毒癥患者，根據(jù)結局分為死亡組與非死亡組，采集入院后第1、3、5、7、14日清晨血清樣本，用ELISA法檢測每樣本的TNF-α與IL-32濃度。細胞

3、實驗:穩(wěn)定傳代的THP-1細胞，經(jīng)PMA誘導48h轉化為巨噬細胞，用CCK-8法檢測PB1對細胞的毒性作用。將誘導后細胞分為空白對照組，CLI-0955μg/ml預孵組，CLI-09510μg/ml預孵組，PB12.5μg/ml預孵組，PB15μg/ml預孵組，PB110μg/ml預孵組，PB120μg/ml預孵組，0加藥組共8組。按相應組別加藥后孵育4小時，每組加入LPS100ng/ml，18小時后取細胞培養(yǎng)上清檢測TNF-α與IL-

4、32濃度。將收集的數(shù)據(jù)結果應用SPSS22.0進行統(tǒng)計描述，用ANOVA等方式檢驗各組數(shù)據(jù)間差異，取P＜0.05時認為有統(tǒng)計學意義。
　　結果:臨床研究中32例患者，在多數(shù)檢測時間點死亡組患者的血清中TNF-α與IL-32濃度明顯高于非死亡組，差別經(jīng)檢驗具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。細胞實驗中成功地對THP-1細胞進行了誘導，使其轉化為巨噬細胞。并在此基礎上用LPS100ng/ml刺激細胞，建立了“膿毒癥”細胞模型，以模仿膿毒癥

5、在人體內發(fā)生過程。用CLI-095阻斷TLR4信號通路可明顯降低LPS刺激下THP-1細胞源性巨噬細胞細胞因子TNF-α與IL-32的產(chǎn)生。PB1亦起到CLI-095相似的抗炎作用，并在一定的PB1濃度范圍內呈劑量依賴性。PB1對處于炎癥反應中的THP-1細胞源性巨噬細胞發(fā)揮最大的保護作用的最佳濃度為10μg/ml。
　　結論:TNF-α與IL-32在一定程度上指示了膿毒癥的嚴重程度。阻斷TLR4信號通路可明顯降低LPS刺激下TH