小鼠CGRP基因重組腺病毒載體的構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:利用AdEasy腺病毒載體系統(tǒng),構建并鑒定小鼠降鈣素基因相關肽基因(calcitonin gene-related peptide,CGRP)重組腺病毒載體。方法:采用RT-PCR方法擴增出含有小鼠CGRP全長cDNA的基因片段并與PUC57重組,經測序驗證無誤后,將小鼠CGRP基因亞克隆至穿梭質粒pshuttle-CMV上。在大腸桿菌BJ5183中與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1進行同源重組產生重組腺病毒質粒,經過抗性篩選以及

2、酶切鑒定得到陽性的重組質粒在XL-Gold細胞中擴增。然后在人胚腎293細胞中進行重組腺病毒的包裝擴增,并經氯化銫純化得到重組腺病毒AdEasy-pShuttle-CGRP。結果:測序證實PUG57-CGRP重組質粒中含有小鼠CGRP基因的cDNA;重組穿梭質粒pshuttle-CMV-CGRP經雙酶切鑒定后可見約7.5kb和423bp片段;重組腺病毒質粒AdEasy-pShuttle-CGRP經PacⅠ酶切可見長約3.0kb與30.0

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