云南地區(qū)恒河猴MHC部分基因頻率及多態(tài)性的分析.pdf

1、不同種群的恒河猴(Macacamulatta)MHC(majorhistocompatibilitycomplex)基因的差異性，很大程度上影響了用其作為動物模型的實驗研究結果的穩(wěn)定性、可靠性和可重復性。因此清晰的了解云南地區(qū)恒河猴種群免疫遺傳學背景對于運用該種群開展各項研究是非常重要的。 恒河猴MHCⅠ類基因Mamu(MacacamulattaMHCgene)-A目前已有大量報道證明它與很多疾病的易感性和發(fā)病進程相關。Mamu

2、-A*01位點陽性就被公認與猴免疫缺陷病毒(SIV)的感染與延緩病程相聯系。另外A﹡02、A﹡04也有報道證實這兩個位點同樣與SIV感染后的病程發(fā)展有關；Mamu-Ⅱ類基因在很多疾病尤其是病毒感染中也起了非常重要的作用，部分位點被證明也與SIV感染后的病程發(fā)展有關。 針對目前研究熱點的恒河猴MHC基因MamuⅠ類基因及Ⅱ類基因部分位點，采用序列特異性引物一聚合酶鏈式反應分型方法(PCR-SSP)，對云南地區(qū)的140只恒河猴(其中

3、92只來源于云南景東野外自然繁殖群、48只來源于本靈長類中心自繁群)的MamuⅠ類基因Mamu-A﹡01至A﹡06這6個等位基因，和MamuⅡ類基因Mamu-DRB區(qū)的Mamu-DRBI*0303、0305/06、0309、0403、1005/07：DRB3*0403；DRB5*0301/02；DRB6*0101、0103、0104/05這10個等位基因進行檢測。統(tǒng)計結果顯示MamuⅠ類基因Mamu-A﹡01至A﹡06位點結果為陰性；所

4、檢測的MamuⅡ類基因Mamu-DRB區(qū)10個等位基因陽性率分別為，野外群DRB1*0305/06位點34.8％；DRB1*0309位點41.3％；DRB1*0403位點27.2％：DRB3*0403位點40.2％；DRB6*0101位點40.2％；DRB6*0103位點95.7％。自繁群DRB1*0305/06位點45.8％；DRB1*0309位點58.3％；DRB1*0403位點22.9％；DRB3*0403位點66.7％；DRB6

5、*0101位點54.2％；DRB6*0103位點62.5％，其余位點結果為陰性。與國內其他地區(qū)及印度猴群比較發(fā)現，云南地區(qū)的猴群攜帶的MHC基因有所不同。另外比較云南地區(qū)的野外群與自繁群的MHC基因情況發(fā)現，這兩個群體間并未出現基因多態(tài)性的顯著差別。 為進一步驗證檢測出的各位點各等位基因擴增產物的正確性，選?、蝾惢騇amu-DRB區(qū)的Mamu-DRB1*0305/06、0309位點進行了部分測序并結合單鏈構象多態(tài)性分析(SSC

6、P)的方法進行深入分析。發(fā)現抽取的三個Mamu-DRB1*0305/06位點陽性樣本測序結果中2個與GenBank參考序列完全相同，另一個檢測出5個堿基的突變；隨機抽取的2個Mamu-DRB1*0309位點陽性樣本測序結果都與GenBank參考序列完全相同。SSCP檢測結果顯示有大于80％的陽性樣本與測序樣本相同，即含同一等位基因，引物針對本次實驗研究種群特異性較好。初步證明用SSCP方法進行準確性控制是可行的。 直接測序和SS