苯達(dá)莫司汀（Bendamustine）誘導(dǎo)小鼠乳腺癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究.pdf

1、背景：乳腺癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率近年來呈上升趨勢。在多種治療乳腺癌的方法中，化療仍是最為常用且效果較明顯的重要手段之一。然而現(xiàn)有的化療藥物或多或少都會引起藥物耐受性的產(chǎn)生，因此，尋找有效殺傷乳腺癌細(xì)胞的化療藥物已成為研究者當(dāng)前的主要任務(wù)之一。臨床研究表明，作為氮芥類藥物且具多種功能的烷化劑，苯達(dá)莫司汀(Bendamustine)對乳腺癌有較好的療效。然而，相關(guān)的研究數(shù)據(jù)有限，作用機(jī)制不清楚。由于很多小分子化療藥物可通過影

2、響腫瘤細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制腫瘤細(xì)胞的生長，因此本文重點(diǎn)研究苯達(dá)莫司汀對體外培養(yǎng)的小鼠乳腺癌C127細(xì)胞周期和誘導(dǎo)凋亡的作用及作用機(jī)制，以期為腫瘤生物學(xué)和腫瘤化療提供理論依據(jù)。 目的：觀察抗癌藥物苯達(dá)莫司汀對體外培養(yǎng)的小鼠乳腺瘤細(xì)胞系C-127生長抑制及其作用機(jī)制，以期在細(xì)胞水平上為治療乳腺癌提供相關(guān)的理論依據(jù)。 方法： 細(xì)胞增殖檢測方法：采用形態(tài)學(xué)觀察和細(xì)胞記數(shù)法檢測苯達(dá)莫司汀對C127細(xì)胞形態(tài)和存

3、活率的影響： 細(xì)胞凋亡檢測方法：用吖啶橙染色法，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核的形態(tài)變化和凋亡小體；TUNEL法檢測DNA的片段化； 細(xì)胞凋亡和壞死的鑒別：檢測乳酸脫氫酶(LDH)的釋放區(qū)分壞死和凋亡； p53蛋白表達(dá)測定：免疫熒光結(jié)合激光共聚焦掃描顯微技術(shù)測定細(xì)胞中p53的表達(dá)情況： 細(xì)胞周期的變化：流式細(xì)胞術(shù)檢測苯達(dá)莫司汀對C127細(xì)胞周期的影響。 結(jié)果： 1．相差顯微鏡觀察顯示

4、：苯達(dá)莫司汀20μg/ml作用C127細(xì)胞24h之后細(xì)胞形態(tài)無明顯變化，48h后細(xì)胞表現(xiàn)出凋亡的特征，細(xì)胞突起變少，細(xì)胞中顆粒和空泡增加，細(xì)胞核明顯增大。苯達(dá)莫司汀4μg/ml作用C127細(xì)胞24h，48h后細(xì)胞都表現(xiàn)出凋亡的特征，48h后可見少量的凋亡小體。 2.細(xì)胞計(jì)數(shù)表明：苯達(dá)莫司汀對C127的生長有明顯抑制作用，并呈明顯的劑量時(shí)間依賴性。 3.吖啶橙染色顯示：苯達(dá)莫司汀可使C127細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)凝集、核片段化

5、以及出現(xiàn)凋亡小體。 4．TUNEL檢測表明：藥物處理后，C127細(xì)胞呈現(xiàn)DNA的片斷化以及核片斷化。 5.LDH活性檢測顯示：C127細(xì)胞采用苯達(dá)莫司汀20μg/ml處理48h后，與對照組相比培養(yǎng)液中LDH含量無明顯差異(P>0.05)，苯達(dá)莫司汀40μg/ml處理48小時(shí)，與對照組相比培養(yǎng)液中LDH含量明顯升高(P<0.05)。 6.免疫熒光試驗(yàn)表明：苯達(dá)莫司汀可使C127的p53的表達(dá)升高(P<0.05

6、)。 7.分析細(xì)胞DNA含量發(fā)現(xiàn)：苯達(dá)莫司汀作用細(xì)胞24-48h后可使細(xì)胞分別阻抑在G2/M和G1/S期，并呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。 結(jié)論： 1.苯達(dá)莫司汀對小鼠乳腺癌細(xì)胞的生長有明顯抑制作用，并呈明顯的劑量和時(shí)間依賴性。 2.不同濃度的苯達(dá)莫司汀引起細(xì)胞的死亡方式不同，低濃度以凋亡為主，高濃度則表現(xiàn)為壞死。 3.苯達(dá)莫司汀可能是通過是上調(diào)p53蛋白的表達(dá)來傳遞凋亡信號。 4.苯達(dá)莫司