氟維司群對(duì)乳腺癌細(xì)胞EMT表型的影響及其信號(hào)機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討氟維司群（ICI182780，ICI）對(duì)乳腺癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）表型的影響及其信號(hào)機(jī)制，為探尋治療乳腺癌的高效方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:以雌激素受體（Estrogen receptor，ER）陽(yáng)性、G蛋白偶聯(lián)雌激素受體（G protein-coupled estrogen receptor，GPER）陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞 MCF-7和

2、ER陰性、GPER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468為研究模型；常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)，以 ICI（E2作為對(duì)照）刺激處理模型細(xì)胞，需要時(shí)用GPER抑制劑G15預(yù)處理細(xì)胞；采用劃痕修復(fù)和侵襲小室實(shí)驗(yàn)分別考察細(xì)胞遷移和侵襲能力；通過(guò)蛋白印跡法檢測(cè)細(xì)胞蛋白表達(dá)水平；Sh-RNA-CANP2轉(zhuǎn)染細(xì)胞以沉默其基因的表達(dá)，嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。
　　結(jié)果：（1）ICI（10μM）或E2（50nM）刺激模型細(xì)胞，可明顯增強(qiáng)MCF-7細(xì)胞遷移率（P

3、＜0.05 vs DMSO）和侵襲率（P＜0.01 vs DMSO）；MDA-MB-468細(xì)胞遷移率和侵襲率也明顯升高（P＜0.01 vs DMSO）。（2）ICI或E2處理模型細(xì)胞，MCF-7細(xì)胞纖連蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.05，P<0.01 vs DMSO），E-鈣黏素（E-cadherin，E-Cad）表達(dá)下調(diào)（P<0.01，P<0.05 vs DMSO）；MDA-MB-468細(xì)胞 FN表達(dá)也明顯

4、上調(diào)，E-Cad表達(dá)下調(diào)（P<0.05 vs DMSO）。（3）給予G15（10μM）預(yù)處理模型細(xì)胞后，MCF-7細(xì)胞ICI或E2處理組遷移率均下降（P＜0.05，P＜0.01 vs ICI），侵襲率降低（P＜0.01，P＜0.05 vs ICI）；MDA-MB-468細(xì)胞遷移率降低（P＜0.05，P＜0.01 vs ICI），侵襲率也降低（P＜0.05 vs ICI）。（4）G15還可明顯抑制ICI或E2誘導(dǎo)的模型細(xì)胞FN的上調(diào)（P<

5、0.01 vs ICI或E2），MDA-MB-468細(xì)胞E-cad的下調(diào)(P＜0.05 vs ICI或E2），但對(duì)MCF-7細(xì)胞E-cad表達(dá)無(wú)明顯影響(P＞0.05 vs ICI或E2）。（5）Sh-RNA轉(zhuǎn)染沉默模型細(xì)胞CANP2表達(dá)可明顯降低細(xì)胞遷移和侵襲能力（P＜0.05 vs NCSH）。（6）CANP2沉默可下調(diào)模型細(xì)胞FN表達(dá)（P＜0.01）（P＜0.05 vs NCSH），上調(diào)細(xì)胞E-cad的表達(dá)（P＜0.01 vs N

6、CSH）。（7）Sh-RNA轉(zhuǎn)染沉默模型細(xì)胞CANP2表達(dá)，E2或 ICI誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞遷移率和侵襲率均下降（P＜0.05 vs NCSH）；MDA-MB-468細(xì)胞兩處理組遷移率下降（P＜0.05 vs NCSH），侵襲率降低（P＜0.01 vs NCSH）。（8）CANP2表達(dá)沉默，E2或ICI誘導(dǎo)的模型細(xì)胞FN的上調(diào)及E-cad表達(dá)的下調(diào)被明顯抑制（P＜0.05 vs NCSH）。
　　結(jié)論：ICI能誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞從E