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1、浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶親環(huán)蛋白A的表達(dá)與亞細(xì)胞定位研究姓名：唐田娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張耀洲20090301浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractCyclophilin，whichisfoundasakytoplasmfamilyproteinin1984ItwasnamedforbindingwithcyclosporineA(CsA)CsAisanimportantmedicinetopro
2、tectrejectreactioninexplantationofhumanorgantransplantationCsAmayblockitsactivenessbydisturbtheTcellssignalconductionCsAdisplayimmunosuppressionfunctiononlywhenformCsA—CyclophilincomplexwithinterestproteinCyclophilinAcco
3、rdingtothelarge—scaleeDNAsequencingofsilkwormpupae，aBombyxmoriCyclophilinAeDNAwasidentifiedafterBlastbasedonNCBIdatabase，ofwhichtheacw七ssionnumberWasAB206402ThisORFcontained498bp，encodingapolypeptideof165aminoacidswithap
4、redictedmolecularweightof1796kDaAfterclonedintopET一28aandexpressedinEcoliBL21(DE3)，theBmCyPAWasfusedwithHistagandpurifiedonchelatingcolumnsThemolecularweightofthisfusionproteinwas214100Da(Histagwasweightof356kDaandBmCyPA
5、wasweightof1796kDa)，characterizedbymassspectrumafarlacingfurtherpurifiedon10RIFPLCThisresultprovedthatHistagBmCyPAWasexpressedintherightformThepurifiedfusionproteinWasusedtoimmunizeamaleNewZealandrabbitThenantiserumWasha
6、rvested，andlgGwaspreparedbyaffinitychromatographyusingimmobilizedproteinASometissuesofthefiRhinstarlarvae，suchashead，Malpighiantubule，epidermis，silkglands，seminalglands，gutfattybody，wereextractedandanalyzedbyWesternblott
7、ingTheresultshowedthatBmCyPAexistedinlarva’Sepidermis，gutheadMalpighiantubule，seminalglandsonthedecreaseHowevernonewasdetectedinlarvassilkglandsandfattybodyAndwegotthesimilarresultswhenwecarriedoutimmunohistochemistryana
8、lysiswiththetiP&instarlarvaandpupaAftercarryingoutsubcellularlocalizationaboutBmCyPA，wefoundthatitmainlyexistedincytoplasmWealsocomparedthequantityofBmCyPAmRNAindifferenttissuesofthefiRhinstarlarvaanddifferentstagesofsil
9、kwormTheseresultssuggestedthatBmCyPAselectivelyexpressedinsilkworm’Sheadgutepidermis，spiracleandMalpighiantubuleKeywordsBombyxmori；CyelophilinA；prokaryoticexpression；tissuelocalization；subcellularlocalizafion；realtimePCR
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