家蠶ZNFHIT基因的原核表達以及亞細胞定位.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩65頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、在對家蠶蛹期cDNA文庫測序中，我們篩選到一條cDNA序列，通過生物信息學(xué)分析，推測可能是家蠶一鋅指蛋白基因。該基因長度為101.bp，由3個外顯子和2個內(nèi)含子構(gòu)成，ORF長46.bp，編碼153個氨基酸殘基，蛋白分子量17.6.kD，因此我們將其命名ZNFHIT(zin.finge.HIT)，GenBank登錄號為DY230769。
　　 通過PCR把ZNFHIT的ORF擴增后插入到載體pET-28a(+)的Bam.I和Xh.

2、I位點，獲得重組表達質(zhì)粒pET-28a(+)-ZNFHIT，轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3)，經(jīng)PCR、酶切鑒定以及測序分析證實重組正確。我們利用大腸桿菌表達系統(tǒng)成功表達了含有His標(biāo)簽的ZNFHIT融合蛋白，分子量合計為21167 Da。融合蛋白以不溶性的包涵體的形式存在，超聲波裂解菌體分離包涵體并離心、洗滌：對包涵體進行溶解和梯度透析復(fù)性；采用親和層析純化融合蛋白ZNFHIT。經(jīng)FPLC反相柱層析進一步純化，然后進行質(zhì)譜分析，得

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論