CCR7的表達(dá)及與配體CCL19對鼠小膠質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)功能的影響.pdf

1、趨化因子與表達(dá)于細(xì)胞表面的受體共同作用發(fā)揮其生物學(xué)功能。趨化因子受體均為G蛋白偶聯(lián)受體，與趨化因子結(jié)合后，通過G蛋白變構(gòu)而使受體磷酸化，進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。CCR7是由EBV誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn)的基因，被認(rèn)為是EBV在B淋巴細(xì)胞上作用的調(diào)節(jié)因子。CCR7受體表達(dá)于各種淋巴組織，并激活T、B淋巴細(xì)胞。作為免疫系統(tǒng)中一個重要的歸巢受體，CCR7不僅控制B細(xì)胞和T細(xì)胞歸巢、DCs穿過高內(nèi)皮靜脈，而且還能把它們正確定位在外周淋巴器官的T、B細(xì)胞區(qū)。CCR7可能

2、對趨化成熟DCsL生入淋巴管非常重要。SLC是由淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的，從淋巴管，DCs回流到本地LN，最終定位于T細(xì)胞區(qū)。這一最后定位過程可能被ELC控制，因為ELC被定居在此的成熟DCs產(chǎn)生。在免疫刺激或炎癥刺激后，DCs從外周組織遷移到淋巴器官，提呈抗原。在此過程中由非成熟DCs轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒霥Cs，在成熟過程中下調(diào)兩個CC趨化因子受體：CCR1、CCR5，對其配體(HCC-1，MIP-1β)的趨化活性消失，但上調(diào)CCR7表達(dá)。對呈現(xiàn)在

3、炎癥位點(diǎn)或免疫位點(diǎn)的趨化因子的反應(yīng)的抑制使其離開外周組織，對SLC、ELC的反應(yīng)引導(dǎo)其定位到淋巴器官。由于CCR7重要性，研究者在不同的細(xì)胞對這一趨化因子受體進(jìn)行大量研究，然而到目前為止，還沒有關(guān)于小膠質(zhì)細(xì)胞中CCR7表達(dá)情況的研究。近年來發(fā)現(xiàn)，CCL21與其中一個CXCR3互作誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的趨化。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在CNS中這一信號系統(tǒng)不可能發(fā)揮重要作用。 本試驗用3d內(nèi)gcd-10野生型小鼠作為實驗材料，首次采用RT-PC

4、R和Western blotting方法，發(fā)現(xiàn)活化的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CCR7，然而在靜息狀態(tài)下并不表達(dá)。LPS活化的原代小膠質(zhì)細(xì)胞CCR7的表達(dá)量隨時間和LPS處理劑量的變化而變化。同時，我們還發(fā)現(xiàn)Cell Debris處理的小膠質(zhì)細(xì)胞中也有CCR7的表達(dá)，而IFN-γ激活的小膠質(zhì)細(xì)胞并不表達(dá)。 TGF-β1與多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生有關(guān)：TGF-β1能抑制各種細(xì)胞因子的表達(dá)。本試驗使用TGF-β1處理LPS活化的小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，TG

5、F-β1可明顯抑制CCR7 mRNA的表達(dá)。本試驗還使用了P13K、MEK/ERK和p38信號通路的阻斷劑LY294002、U0126和SB203580處理原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞，結(jié)果沒有檢測到LY294002或SB203580影響CCR7 mRNA的表達(dá)，U0126上調(diào)CCR7的表達(dá)。 本試驗還檢測了LPS處理的小膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α和iNOS mRNA表達(dá)。LPS活化的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)前炎癥因子TNF-α和iNOS mRNA，且

6、TNF-αmRNA的表達(dá)早于iNOS mRNA。LPS處理6h，TNF-α mRNA在所選取的處理時間表達(dá)量最高，24h的表達(dá)量與處理前的表達(dá)水平相當(dāng)；iNOS的表達(dá)峰值出現(xiàn)在LPS處理6h，并且直到24h iNOS mRNA仍然維持高水平表達(dá)活化的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CCR7促使我們研究該受體與其配體CCL19對細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。 結(jié)果表明，LPS處理的小膠質(zhì)細(xì)胞的死亡率約為20％，當(dāng)加入CCL19后，細(xì)胞死亡率降低到10％左

7、右，提示CCL19能減少約50％LPS處理的小膠質(zhì)細(xì)胞死亡率，因此CCL19與其受體作用可以降低細(xì)胞的死亡率。我們還發(fā)現(xiàn)，在LPS處理的小膠質(zhì)細(xì)胞中加入CCL19后，可顯著提高細(xì)胞的吞噬作用和胞內(nèi)Ca<'2+>濃度。 結(jié)論：LPS或Cell Debris活化的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CCR7，而處于靜息狀態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞并不表達(dá)該趨化因子受體：CCR7的配體MIP-3β可提高LPS處理的小膠質(zhì)細(xì)胞的存活率、吞噬作用以及胞內(nèi)Ca<'2+>濃