稻瘟病菌液泡運輸途徑相關基因MoYpt7和MoMon1的克隆和功能分析.pdf

1、液泡在調控細胞的生長發(fā)育方面具有多重作用。真菌的液泡和哺乳動物中的溶酶體以及植物中的液泡有類似的功能，包括離子的代謝和儲存、pH和滲透壓調控、營養(yǎng)運輸以及細胞凋亡等。液泡是真菌生理活動中的關鍵細胞器，直接參與菌絲細胞內的長距離營養(yǎng)運輸，調控菌絲的擴展和分支的形成;通過對自噬的調控間接參與真菌某些關鍵結構的形成，如附著胞的形成和假菌絲的生長等。稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）是一種嚴重危害水稻產量的植物病原絲狀真菌;同時稻

2、瘟病菌也是研究病原真菌與寄主植物互作的模式生物之一。了解其致病過程和機理對于水稻稻瘟病的防治有重要作用。
　　 本論文主要研究和闡明液泡運輸與稻瘟病菌生長、發(fā)育和致病性之間的關系。獲得的主要研究結果如下:
　　 1)在稻瘟病菌附著胞的差減文庫中，找到了細胞自噬相關基因的EST(expressedsequence tags)，進而找到基因，定名為MoYpt7，通過保守結構域分析該基因編碼RabGTPase。對MoYpt7進

3、行細胞定位，該基因在菌絲和分生孢子的液泡膜上強烈表達;通過構建MoYpt7基因置換載體，得到基因MoYpt7缺失突變體△MoYpt7。
　　 2)△MoYpt7突變體在CM培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)發(fā)生變化，菌絲稀疏;幾乎不產孢，少數(shù)孢子可以萌發(fā)，但不形成附著胞;在完整的水稻或者大麥葉片上不能形成可見病斑，對水稻根部也不能完成侵染，致病性喪失;突變子在OMA培養(yǎng)基上與2539菌株交配，不能產生子囊殼，育性受到影響;基因MoYpt7缺失，

4、細胞自噬過程中斷，菌絲中大量小液泡聚集。
　　 3)通過同源序列比對，PCR的方法，得到液泡運輸相關基因MoMon1;將稻瘟病菌MoMon1基因，互補到酵母Mon1基因缺失突變體中，能夠恢復酵母的液泡形態(tài);通過構建MoMon1基因置換載體，得到基因MoMon1缺失突變體△MoMon1。
　　 4)基因缺失突變體MoMon1，液泡融合受阻，細胞自噬過程中斷;菌落形態(tài)改變，菌絲稀疏;孢子產量顯著下降，不能形成附著胞;與253