基于轉(zhuǎn)錄組學(xué)的小菜蛾腦神經(jīng)肽的鑒定與表達規(guī)律研究.pdf

1、本文對小菜蛾腦組織轉(zhuǎn)錄組進行了測定及分析，明確了幼蟲期腦組織中基因的組成和種類以及它們在菜蛾盤絨繭蜂寄生后的數(shù)字表達譜，從中鑒定出一批腦神經(jīng)肽基因，并用qrt-PCR的方法檢測和比較了他們在寄生和未寄生小菜蛾腦組織中的表達模式?，F(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下:
　　 1.小菜蛾腦組織轉(zhuǎn)錄組測序及功能注釋
　　 使用Illumina測序技術(shù)對小菜蛾腦組織轉(zhuǎn)錄組進行測序，共得到7，115，762個reads，總長度為1，280，837，1

2、60個核苷酸，reads平均讀長為180bp。Reads通過系列拼接得到42，441個unigene序列。E值的閾值為1.0E-5時有19，144個unigene在Nr有序列相匹配?？勺⑨屝蛄兄?5.5％的比對結(jié)果E值在1.0E-50到1.0E-5之間;相似度的分析發(fā)現(xiàn)34.6％的序列與比對上序列的相似度大于60％。比對時排第一的序列進行物種分析發(fā)現(xiàn)，比例最大的是意大利蜜蜂26.3％，同為鱗翅目的家蠶占5.79％。
　　 2.神

3、經(jīng)肽基因的鑒定
　　 根據(jù)Nr功能注釋結(jié)果，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中有19種已知的神經(jīng)肽基因EST序列,它們是:AllatostatinA(AstA)、Allatostatin C(AstC)、Allatotropin(AT)、Allatotropin(AT)、Bursicon(BUR)、Partner ofBursicon(PBUR)、CCHamide、CHH-like protein precursor、Crustacean car

4、dioactive peptide(CCAP)、Diuretichormone isoform DH45 precursor、FMRFamide、FMRFamide-related peptides(FaRPs)、Ion-transport peptide、precursor-like protein(ITP)、Leucokinin(LK)、Neuroparsin、Neuropeptide F2(NPF2)、Neuropeptide-l

5、ike precursor1(NPLP1)、Prothoracicotropic hormone precursor(PTTH)、Short neuropeptide F(sNPF)、Tachykinin(TK)、Tachykinin(TK)。通過反轉(zhuǎn)錄PCR驗證了其中6個神經(jīng)肽基因的存在，即:A型咽側(cè)體抑制肽AstA，咽側(cè)體活化肽AT，鞣化激素BUR及PBUR，促前胸腺激素PTTH和類甲殼心律肽CCAP。
　　 3.小菜蛾腦組

6、織數(shù)字基因表達譜測序
　　 本論文共測了小菜蛾3齡中、3齡末及被菜蛾盤絨繭蜂寄生后12、24、48、72、120、168小時等不同發(fā)育時期腦組織的數(shù)字基因表達譜，發(fā)現(xiàn)寄生24小時與3齡末相比上調(diào)基因有1974個，下調(diào)基因有1749個，但神經(jīng)肽同源序列沒有顯著變化;差異表達基因中有517個可以匹配到GO功能聚類中，其中下調(diào)基因有433個。
　　 4.神經(jīng)肽轉(zhuǎn)錄水平表達模式分析
　　 通過實時定量PCR方法對6個已驗