羅非魚(yú)皮膠原蛋白及多肽美容護(hù)膚作用研究.pdf

1、本文通過(guò)脂肪酶的使用縮減羅非魚(yú)皮脫脂時(shí)間從而優(yōu)化酸溶性膠原蛋白提取的預(yù)處理工藝，分析、測(cè)定所提膠原蛋白的理化性質(zhì)，并用所提膠原蛋白制備梯級(jí)膠原蛋白多肽，進(jìn)而通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究膠原蛋白及多肽對(duì)皮膚狀況的改善效果。
　　首先，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定羅非魚(yú)皮膠原蛋白提取工藝中的最耗時(shí)步驟為魚(yú)皮脫脂工序。采用脂肪酶脫脂代替有機(jī)溶劑脫脂的方法，以縮短脫脂工藝時(shí)間。以脫脂率為指標(biāo)，單因素實(shí)驗(yàn)確定影響脫脂率的顯著因素為脂肪酶添加量、脫脂時(shí)間、脫脂溫度;運(yùn)

2、用Box-Benhnken中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法優(yōu)化脫脂條件，得出羅非魚(yú)皮酶法脫脂的最優(yōu)工藝參數(shù)為:pH9、加酶量0.5％、脫脂溫度39℃、脫脂時(shí)間56 min，在此條件下魚(yú)皮的脫脂率為63.71％。
　　其次，采用上述脫脂工藝處理的羅非魚(yú)皮，乳酸法提取膠原蛋白，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，羅非魚(yú)皮膠原蛋白在232 nm處出現(xiàn)最大吸收峰而在280 nm處沒(méi)有強(qiáng)吸收峰，這與I型膠原蛋白的特征吸收一致;SDS-PAGE電

3、泳圖譜表明該膠原蛋白的肽鏈組成為α1，α2，β，電泳條帶的位置表明膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)完整;通過(guò)熱變性曲線得出羅非魚(yú)皮膠原蛋白的熱變性溫度為32.7±0.25℃。結(jié)合理化性質(zhì)檢測(cè)的結(jié)果可知，脂肪酶法脫脂工藝可大大縮短魚(yú)皮脫脂處理的時(shí)間，并且不會(huì)導(dǎo)致羅非魚(yú)皮中的膠原蛋白理化特性或分子的改變。
　　再次，利用胰蛋白酶和堿性蛋白酶復(fù)合，酶解膠原蛋白，制備分子量(Molecular weight, Mw) Mw＜3000 Da、3000

4、Da＜Mw＜5000 Da、Mw＞5000Da的羅非魚(yú)皮膠原蛋白多肽。對(duì)梯級(jí)膠原蛋白多肽的含水量、總蛋白、灰分、純度及平均分子量分布進(jìn)行分析得知，各梯級(jí)多肽純度約為85％，其中混有少量的水分、無(wú)機(jī)鹽以及非膠原類蛋白。通過(guò)高效液相凝膠色譜對(duì)各級(jí)多肽進(jìn)行檢測(cè)，平均分子量均在所屬分子量肽段內(nèi)，可以用于動(dòng)物皮膚涂抹實(shí)驗(yàn)。
　　最后，在小鼠皮膚上連續(xù)涂抹膠原蛋白及各梯級(jí)膠原蛋白多肽45 d，通過(guò)測(cè)定小鼠皮膚角質(zhì)層水含量、皮膚白度、皮膚組織形