小潮氣量聯(lián)合呼吸末正壓通氣對呼吸機相關性肺炎發(fā)生、發(fā)展的影響.pdf

1、第一部分小潮氣量聯(lián)合呼氣末正壓通氣對健康大鼠肺和全身炎癥反應的影響
　　 目的：探討小潮氣量聯(lián)合呼氣末正壓（PEEP）通氣對健康大鼠肺和全身炎癥反應的影響及其臨床意義。
　　 方法：清潔級雄性SD大鼠56只，體重242～286g，隨機分為7組（n=8）：對照組（C組），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣60min組（P60組），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣120min組（P120組），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣240min組（P240組

2、），大潮氣量通氣240min組（H240組），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣240min后恢復2d組（R組）和小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣血氣分析組。小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣參數(shù)設置如下：潮氣量（VT）6ml/kg，呼吸頻率（RR）88次/min，呼氣末正壓(PEEP)5 cmH2O，吸入氧濃度(FIO2)21％。大潮氣量通氣參數(shù)設置如下：VT 40ml/kg，RR 88次/min，PEEP 5 cmH2O，F(xiàn)IO221％。觀察肺組織病理學改變，

3、測定肺濕干重比（W/D）、髓過氧化物酶（MPO）活性，脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記（TUNEL）檢測肺細胞凋亡，逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測肺組織白介素-1β（IL-1β）Mrna，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）Mrna和巨噬細胞炎性蛋白-2（MIP-2）Mrna的表達，酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測血漿中IL-1β，TNF-α和MIP-2濃度。
　　 結論：小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣能引起肺部和全

4、身短暫性炎癥反應。在這種短暫性炎癥反應情況下，機體抗御外來損傷性打擊或抗感染能力下降，機體更易遭受 “二次打擊”。
　　 第二部分小潮氣量聯(lián)合呼氣末正壓通氣建立耐甲氧西林金黃色葡萄球菌呼吸機相關性肺炎大鼠模型
　　 目的：建立耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）呼吸機相關性肺炎（VAP）大鼠模型并評估小潮氣量聯(lián)合呼吸末正壓（PEEP）通氣對肺炎發(fā)生、發(fā)展的影響。
　　 方法：清潔級雄性SD大鼠100只，體重242

5、～286 g，隨機分為4組：非通氣肺炎組（N組，n=44），呼吸機相關性肺炎組（V組，n=44），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣組（P組，n=6）和對照組（C組，n=6）。N組大鼠直接經氣管導管注入0.2 ml 1010cfu/ml MRSA，V組大鼠4 h小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經氣管導管注入0.2 ml 1010cfu/ml MRSA，P組大鼠4 h小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經氣管導管注入0.2 ml生理鹽水，C組大鼠直接經氣管導管注入

6、0.2 ml生理鹽水。小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣參數(shù)設置如下：潮氣量（VT）6ml/kg，呼吸頻率（RR）88次/min，PEEP 5 cmH2O，吸入氧濃度(FIO2)21％。P組和C組大鼠于滴注生理鹽水48 h后放血處死。N組和V組于細菌接種后3 h，6 h，12 h，24 h各處死6只大鼠，接種后48 h處死10只大鼠。N組和V組余下的10只大鼠用于觀察5 d生存率。觀察肺改變，記錄肉眼和病理學評分，N組和V組接種細菌48 h后菌血

7、癥發(fā)生率和5 d生存率，測定肺濕重與體重比（WW/BW）和肺細菌濃度。
　　 結論：4 h的小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經口接種2×109 cfu MRSA可建立大鼠MRSA VAP模型。MRSA VAP無論是在組織病理學改變方面還是細菌學方面均重于未通氣MRSA肺炎。小潮氣量加PEEP通氣降低肺清除細菌的能力，促進感染在肺內和全身的蔓延。
　　 第三部分小潮氣量聯(lián)合呼氣末正壓通氣對耐甲氧西林金黃色葡糖球菌呼吸機相關性肺炎

8、大鼠肺組織β－防御素-3表達的影響
　　 目的：建立耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）呼吸機相關性肺炎（VAP）大鼠模型并評估小潮氣量聯(lián)合呼吸末正壓（PEEP）通氣對大鼠肺組織β－防御素-3（BD-3）表達的影響。
　　 方法：清潔級雄性SD大鼠100只，體重242～286 g，隨機分為4組：非通氣肺炎組（N組，n=44），呼吸機相關性肺炎組（V組，n=44），小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣組（P組，n=6）和對照組（C組，

9、n=6）。N組大鼠直接經氣管導管注入0.2 ml 1010cfu/ml MRSA，V組大鼠4 h小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經氣管導管注入0.2 ml 1010cfu/ml MRSA，P組大鼠4 h小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣后經氣管導管注入0.2 ml生理鹽水，C組大鼠直接經氣管導管注入0.2 ml生理鹽水。小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣參數(shù)設置如下：潮氣量（VT）6ml/kg，呼吸頻率（RR）88次/min，PEEP 5 cmH2O，吸入氧濃度

10、(FIO2)21％。P組和C組大鼠于滴注生理鹽水48 h后放血處死。N組和V組于細菌接種后3 h，6 h, 12 h，24 h各處死6只大鼠，接種后48 h處死10只大鼠。N組和V組余下的10只大鼠用于觀察5 d生存率。免疫組織化學和蛋白印跡檢測肺組織BD-3的表達，酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測肺組織中干擾素-γ（IFN-γ）濃度。
　　 結論：MRSA VAP時肺組織BD-3表達要顯著低于未通氣MRSA肺炎，防御素表達的

11、減少可能是小潮氣量聯(lián)合PEEP通氣降低肺清除細菌的能力，促進感染在肺內和全身的蔓延的原因之一。
　　 第四部分 機械拉伸對干擾素-γ誘導肺泡上皮細胞人β－防御素－3表達的影響
　　 目的：研究機械拉伸對干擾素-γ（IFN-γ）誘導肺泡上皮細胞（A549細胞）人β－防御素－3（HBD-3）表達的影響并從細胞層面進一步探討HBD-3在呼吸機相關性肺炎（VAP）發(fā)病機制中的作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)A549細胞，分別

12、給予機械拉伸（S組），10ng/ml IFN-γ（I組）和10ng/ml IFN-γ＋機械拉伸（IS組）3種處理，未處理的細胞為對照組（C組），處理的時間為2 h，4 h和6 h。拉伸由細胞Flexercell-4000TTM拉伸系統(tǒng)提供，拉伸的幅度為20﹪，速率為30次/分。處理后實時定量逆轉錄-多聚酶鏈反應（RT-PCR）檢測HBD-3 Mrna的表達；處理6 h的細胞繼續(xù)培養(yǎng)至24 h，激光掃描共聚焦顯微鏡檢測HBD-3的表達。流