曼氏裂頭蚴病特異性診斷抗原與實驗治療.pdf

1、曼氏裂頭蚴病是由曼氏迭宮絳蟲(Spirometra mansoni)的幼蟲(plerocercoid)-曼氏裂頭蚴(sparganum mansoni)侵入人體引起的疾病。裂頭蚴可侵入皮下組織可形成皮下結(jié)節(jié)，也能夠侵犯腹腔內(nèi)臟器、組織，還可以穿過橫膈侵犯胸腔，危害最大的是侵入眼部和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，可導(dǎo)致殘疾甚至危及生命。目前我國已有1000多例裂頭蚴病報道，分布于27個省、市、自治區(qū)。曼氏裂頭蚴可以在人體內(nèi)移行，因此寄生部位多變，臨床表現(xiàn)

2、各不相同，并且缺乏特異性表現(xiàn)，造成病原學(xué)診斷時誤診、漏診較為普遍。血清免疫學(xué)檢測方法不僅創(chuàng)傷小，而且敏感性高、特異性強(qiáng)、簡便快速經(jīng)濟(jì)，尤其對輕度感染、隱性感染、早期感染、異位寄生和深部組織寄生的病例，是一種較好的術(shù)前輔助診斷手段，可以在一定程度上彌補(bǔ)病原學(xué)和影像學(xué)診斷的不足。
　　 本論文調(diào)查了河南省部分地區(qū)野生青蛙感染裂頭蚴的情況；應(yīng)用裂頭蚴的排泄分泌(excretory-secretory，ES)抗原檢測了小鼠實驗感染曼氏裂

3、頭蚴后不同時間血清IgG抗體水平的變化；同時，比較了曼氏裂頭蚴的ES抗原及可溶性抗原用于ELISA檢測的敏感性和特異性，探討ES抗原應(yīng)用于曼氏裂頭蚴病診斷的價值；另外，通過SDS-PAGE和Western blot方法鑒定了曼氏裂頭蚴排泄分泌物中的特異性診斷抗原組分；并且對不同劑量吡喹酮治療曼氏裂頭蚴感染小鼠的療效進(jìn)行了初步觀察。
　　 方法：
　　 1.調(diào)查河南省部分地區(qū)野生青蛙感染裂頭蚴情況在漯河、扶溝、杞縣、柘城、

4、洛陽、濮陽、羅山、武陟等地區(qū)村莊內(nèi)池塘捕撈野生青蛙，解剖青蛙，仔細(xì)檢查青蛙肌肉內(nèi)是否有曼氏裂頭蚴寄生，并統(tǒng)計感染裂頭蚴的青蛙數(shù)量以及青蛙感染裂頭蚴條數(shù)。
　　 2.小鼠感染曼氏裂頭蚴后不同時間血清IgG抗體水平的變化48只昆明小鼠隨機(jī)分為6組，每組8只，1-5組分別經(jīng)口接種曼氏裂頭蚴1、2、4、6及8條，6組為正常對照。感染后1周開始每周尾靜脈采血，分離血清，至感染后18周。應(yīng)用裂頭蚴排泄分泌(excretory-secreto

5、ry，ES)抗原ELISA檢測血清中抗裂頭蚴IgG抗體水平。
　　 3.曼氏裂頭蚴的ES抗原及可溶性抗原敏感性和特異性的比較分別應(yīng)用曼氏裂頭蚴ES抗原和可溶性抗原ELISA法檢測感染裂頭蚴、旋毛蟲、弓形蟲、血吸蟲的小鼠和正常小鼠血清，以及曼氏裂頭蚴病人、包蟲病人、肺吸蟲病人、肝吸蟲病人、血吸蟲病人和健康人血清。
　　 4.曼氏裂頭蚴排泄分泌物中抗原組分的鑒定應(yīng)用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodec

6、yl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)與免疫印跡(Western blot)對曼氏裂頭蚴ES抗原中的蛋白組分進(jìn)行分析及鑒定，并與可溶性抗原進(jìn)行比較。
　　 5.吡喹酮對曼氏裂頭蚴感染小鼠的療效156只昆明小鼠分2批感染，每只經(jīng)口(灌胃)接種感染5條裂頭蚴。第1批36只小鼠分為6組(每組6只)，1～5組分別接種含不同濃度吡喹酮培養(yǎng)液培養(yǎng)3 d的裂頭蚴，6組接種

7、正常培養(yǎng)液培養(yǎng)3d的裂頭蚴作為對照組；第2批120只小鼠分成12組(每組10只)，分別接種青蛙或蝌蚪體內(nèi)的裂頭蚴，1～9組于感染后1周或5周用不同劑量的吡喹酮灌胃治療，10～12組為對照組。各組小鼠于治療結(jié)束后1周或2周剖殺，收集裂頭蚴數(shù)并計算各組的平均檢出蟲數(shù)和減蟲率。
　　 結(jié)果：
　　 1.河南省部分地區(qū)野生青蛙感染裂頭蚴的情況扶溝、濮陽、漯河、羅山、洛陽、柘城、杞縣和武陟等地村莊內(nèi)池塘野生青蛙感染裂頭蚴的感染率分

8、別為48.43％、33.33％、29.38％、25％、19.35％、14.58％、6.67％和5.88％。平均感染率達(dá)到27.18％，1只青蛙感染裂頭蚴的最多數(shù)量為87條。
　　 2.小鼠感染曼氏裂頭蚴后不同時間的血清IgG抗體水平2條裂頭蚴感染小鼠感染后2周的血清抗體陽性率為87.5％(7/8)，感染后3周升至100％(8/8)；1、4、6及8條裂頭蚴感染小鼠感染后2周抗體陽性率即達(dá)100％(8/8)。5組小鼠均是在感染后1周

9、血清抗體水平快速升高，感染后5～7周達(dá)峰值，之后抗體水平稍有下降，但至實驗結(jié)束時的感染后18周抗體陽性率仍均為100％。5組小鼠感染裂頭蚴后1～18周血清抗體水平間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=245.296，P<0.05)，且抗體水平隨感染劑量的增加而升高。
　　 3.曼氏裂頭蚴的ES抗原及可溶性抗原的敏感性和特異性應(yīng)用曼氏裂頭蚴ES抗原和可溶性抗原檢測感染裂頭蚴、旋毛蟲、弓形蟲、血吸蟲的小鼠血清，二者的敏感性為100％(30/30

10、)，特異性也為100％(84/84)；檢測裂頭蚴病人、包蟲病人、肺吸蟲病人、肝吸蟲病人、血吸蟲病人血清，二者的敏感性同樣為100％(11/11)，但ES抗原的特異性達(dá)到96.7％(59/61)，與可溶性抗原的72.1％(44/61)相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=14.027，P<0.05)。
　　 4.曼氏裂頭蚴排泄分泌物中抗原組分SDS-PAGE結(jié)果顯示，裂頭蚴可溶性抗原有19條蛋白帶，分子量分別為134、129、124、1

11、08、100、80、70、56、47、45、43、40、38、36、35、32、27、24、16 kDa；ES抗原有7條蛋白帶，分子量分別為66、53、42、36、29、24、20 kDa。Western blot結(jié)果表明，可溶性抗原中的36、24 kDa蛋白組分可被裂頭蚴感染小鼠及裂頭蚴病患者血清識別，其他蛋白組分則無抗原活性或與其他寄生蟲感染小鼠或寄生蟲病人血清有交叉反應(yīng)；ES抗原中的36kDa蛋白組分只可被裂頭蚴感染小鼠及裂頭蚴病

12、患者血清識別，而不與旋毛蟲、血吸蟲、弓形蟲感染小鼠及正常小鼠血清產(chǎn)生交叉反應(yīng)，與囊尾蚴病、棘球蚴病、并殖吸蟲病、華支睪吸蟲病、日本血吸蟲病患者血清及健康人血清亦無交叉反應(yīng)。
　　 5.吡喹酮對曼氏裂頭蚴感染小鼠的療效第1批小鼠接種在10～40μg/ml吡喹酮中培養(yǎng)3 d的裂頭蚴后，檢出蟲數(shù)與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，接種在50μg/ml吡喹酮中培養(yǎng)3 d的裂頭蚴后，減蟲率僅為16.60％，各劑量組減蟲率之間差異

13、無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。第2批小鼠感染青蛙體內(nèi)裂頭蚴1周后，用200、400、800 mg/kg吡喹酮治療后1周和2周的檢出蟲數(shù)與對照組相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，相同劑量組治療后1周和2周后減蟲率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；感染蝌蚪體內(nèi)裂頭蚴1周后，200、400mg/kg吡喹酮治療后1周檢出蟲數(shù)與對照組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，800 mg/kg治療后1周減蟲率為17.02％，各劑量組

14、減蟲率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。小鼠感染青蛙體內(nèi)裂頭蚴5周后，用1200、1800mg/kg吡喹酮治療1周和2周后，檢出蟲數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但均明顯高于對照組(P均<0.05)，相同劑量組減蟲率之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.曼氏裂頭蚴ES抗原應(yīng)用于裂頭蚴病的ELISA檢測，其敏感性與可溶性抗原相同，而其特異性優(yōu)于可溶性抗原。小鼠感染不同劑量裂頭蚴后2周即可