羥基脲衍生物HY-D11體外代謝及大鼠體內(nèi)藥代動力學研究.pdf

1、羥基脲(Hydroxyurea，HU)為核糖核苷酸抑制劑類抗腫瘤藥物，是骨髓增生異常綜合征如慢性粒細胞性白血病和真性紅細胞增多癥的經(jīng)典化療藥物。但其不良反應較嚴重，使其在臨床上的應用受到限制。1-(4-溴芐基)-2-(4-溴芐氧基)脲(1-(4-bromobenzyl)-1-(4-bromobenzyloxy)-urea，HY-D11)是對HU進行結(jié)構(gòu)改造所獲得的系列衍生物中最有前景的化合物之一，在動物體內(nèi)外實驗中呈現(xiàn)較強的抗腫瘤作用，

2、且毒性反應很低。
　　 藥代動力學研究在新藥研發(fā)中占有重要的地位，探明HY-D11體內(nèi)過程，研究其代謝及其機制，對于HY-D11能否成為抗腫瘤創(chuàng)制新藥有著重要的意義。
　　 目的：
　　 通過體外大鼠肝微粒體酶抑制實驗，探明HY-D11在大鼠肝臟中的代謝途徑及機制。研究Hy-D11在大鼠體內(nèi)藥代動力學過程，為HY-D11作為抗腫瘤重大創(chuàng)制新藥研發(fā)提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 ①建立反相

3、高效液相-紫外檢測方法，測定大鼠血漿及肝微粒體系溫孵液中HY-D11的濃度。
　　 ②通過考察溫孵時間、肝微粒體蛋白濃度、底物濃度對HY-D11在大鼠肝微粒體溫孵液中代謝的影響，研究HY-D11在大鼠肝微粒體溫孵液中的酶促動力學特征；分別研究CYP1A抑制劑α-萘黃酮(naphthoflavone)、CYP2B抑制劑舍曲林(sertraline)、CYP2C抑制劑槲皮素(quercetin)、CYP2D抑制劑育亨賓(yohimb

4、ine)、CYP2E抑制劑雙硫侖(disulfiram)、CYP3A抑制劑醋竹桃霉素(troleandomycin)對HY-D11在大鼠肝微粒體溫孵液中代謝的影響。
　　 ③SD大鼠6只，按66.7 mg.kg-1的劑量灌胃給予HY-D11混懸液，于給藥前和給藥后不同時間點采集系列血樣，RP-HPLC檢測血漿中HY-D11濃度，運用DAS2.1軟件求算主要藥動學參數(shù)。
　　 結(jié)果：
　　 ①HY-D11的HPLC

5、檢測方法為流動相：乙腈-10mM醋酸銨水溶液(65:35，V：V)；流速：1.0 mL.min-1；檢測波長：225nm；靈敏度：0.004 Aufs；柱溫：室溫。
　　 ②HY-D11在大鼠肝微粒體溫孵液中經(jīng)37℃空氣浴振蕩器振蕩孵育15-60min呈時間依賴性近似線性消除，當孵育時間超過60 min時，HY-D11的代謝速率減慢，故選擇60 min為實驗孵育時間；HY-D11的消除隨著肝微粒體蛋白濃度的增加而增加，在0.25

6、-1.5 mg.mL-1范圍內(nèi)呈近似線性消除，故選擇1.0mg.mL-1作為實驗用肝微粒體蛋白濃度；在已經(jīng)確定的實驗條件下，HY-D11在大鼠肝微粒體溫孵液中的消除呈現(xiàn)明顯的酶促動力學特征：當HY-D11的濃度在0-16μM范圍內(nèi)，HY-D11的代謝呈濃度依賴性，代謝消除量隨底物濃度增加呈近似線性增加，而當濃度超過16μM，Hy-D11代謝消除量不再隨著底物濃度的增加而增加，呈現(xiàn)飽和現(xiàn)象。
　　 ③在酶抑制實驗中，CYP1A抑制

7、劑α-萘黃酮(α-nNap)、CYP2B抑制劑舍曲林(Ser)、CYP2C抑制劑槲皮素(Que)、CYP2D抑制劑育亨賓(Yoh)、CYP2E抑制劑雙硫侖(Dis)對HY-D11在肝微粒體中的代謝消除率沒有影響，與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。而在CYP3A抑制劑醋竹桃霉素(Tro)共孵育的肝微粒體溫孵液中HY-D11的代謝消除率減少，與對照組相比則具有顯著性差異(P<0.01)。
　　 ④HY-D11在大鼠體內(nèi)的藥代動

8、力學過程符合二室模型。主要的藥代動力學參數(shù)：Tmax為3.67±0.52 h，Cmax為1610.35±130.28 ng·mL-1，Vz/F為9540.42±1530.62 mL·kg-1，t1/2z為3.66±0.25 h，MRT(0-∞)為7.05±0.29 h。
　　 結(jié)論：
　　 本實驗建立HY-D11 HPLC檢測方法靈敏、可靠。大鼠肝微粒體中HY-D11線性范圍為0.25-32μM，大鼠血漿HY-D11的線

9、性范圍為50-2400 ng·mL-1，生物樣本中HY-D11低、中、高各濃度方法回收率在85％-115％之間，低、中、高三個濃度批內(nèi)及批間變異RSD均<15％，符合生物樣本分析的要求。
　　 HY-D11在大鼠肝微粒體溫孵液代謝實驗研究的結(jié)果提示HY-D11的代謝具有酶促動力學代謝特征。CYP1A抑制劑α-萘黃酮(α-Nap)、CYP2B抑制劑舍曲林(Ser)、CYP2C抑制劑槲皮素(Que)、CYP2D抑制劑育亨賓(Yoh)

10、、CYP2E抑制劑雙硫侖(Dis)對HY-D11在大鼠肝微粒體溫孵液中的代謝無抑制作用，表明CYP1A、CYP2B、CYP2C、CYP2D、CYP2E不參與大鼠肝臟HY-D11的代謝。CYP3A抑制劑醋竹桃霉素(Tro)對HY-D11的代謝有明顯抑制作用，提示CYP3A可能參與了HY-D11在大鼠肝微粒中的代謝。
　　 灌胃給予HY-D11(66.7mg.kg-1)后，HY-D11在大鼠體內(nèi)的藥代動力學過程符合二室模型。其主要動