miR743a轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控WT1影響后腎間充質(zhì)細(xì)胞增殖凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1.尋找可靶向結(jié)合腎母細(xì)胞瘤抑制基因1（WT1）的潛在miRNA，并闡明其結(jié)合WT1后的效應(yīng)；
　　2.研究miR743a對(duì)后腎間充質(zhì)細(xì)胞增殖、凋亡能力的影響。
　　方法：
　　1.應(yīng)用熒光素酶報(bào)告分析實(shí)驗(yàn)，分析miR743a靶向結(jié)合WT1的3'UTR的能力；
　　2.應(yīng)用熒光定量PCR分析及免疫印跡實(shí)驗(yàn)，比較抑制WT1上miR743a結(jié)合位點(diǎn)前后WT1在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化；
　

2、　3.應(yīng)用EDU增殖實(shí)驗(yàn)及WT1 rescue實(shí)驗(yàn)，研究miR743a對(duì)后腎間充質(zhì)細(xì)胞增殖能力的影響；
　　4.應(yīng)用細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)及WT1 rescue實(shí)驗(yàn)，研究miR743a對(duì)后腎間充質(zhì)細(xì)胞凋亡能力的影響；
　　5.所有的樣品檢測三次。所有的結(jié)果均為平均值±SD和進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)。我們使用GraphPad Prism5軟件（GraphPad，圣地亞哥，CA， USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得到柱狀圖。 P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。