結(jié)球甘藍(lán)原生質(zhì)體培養(yǎng)及植株再生.pdf

1、本試驗(yàn)以結(jié)球甘藍(lán)不同熟性的6個(gè)品種為材料,對(duì)影響其原生質(zhì)體培養(yǎng)的主要因素進(jìn)行了探討；初步建立了適合結(jié)球甘藍(lán)原生質(zhì)體游離、純化、收集、培養(yǎng)以至再生出完整植株的實(shí)用技術(shù)體系；為其非對(duì)稱(chēng)細(xì)胞融合及品種改良與創(chuàng)新等研究奠定了基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:
　　 1.原生質(zhì)體的游離條件優(yōu)化表明:以2％Cellulase R-10+0.5％Pectolase Y-23+9CPW+5mmol／L MES酶液組合的酶解效果最佳。其對(duì)4d苗齡的結(jié)球甘藍(lán)下胚

2、軸原生質(zhì)體進(jìn)行游離純化,16h后以1000rpm,4min的離心條件對(duì)游離的原生質(zhì)體進(jìn)行純化,得到原生質(zhì)體產(chǎn)量為16.85×105個(gè)／g,所獲得原生質(zhì)體活力為86.3％。
　　 2.原生質(zhì)體培養(yǎng)條件的優(yōu)化表明:以YP+NAA 0.2mg／L+2,4-D 0.5mg／L+6-BA.0.2mg／L的原生質(zhì)體培養(yǎng)效果最佳,10d后細(xì)胞分裂頻率與40d后植板率分別為20.8％和0.53％。采用固液雙層培養(yǎng)的方法,細(xì)胞分裂頻率與液體淺層培

3、養(yǎng)相差不大,但植板率明顯大于液體淺層培養(yǎng)法獲得的植板率。由MS培養(yǎng)基添加NAA 0.025mg／L+2,4-D 0.025mg／L+6-BA 0.1mg／L對(duì)結(jié)球甘藍(lán)下胚軸原生質(zhì)體微愈傷組織增殖效果好。MS培養(yǎng)基附加6-BA 2mg／L,ZT 0.5mg／L對(duì)結(jié)球甘藍(lán)下胚軸原生質(zhì)體再生愈傷組織芽分化效果較佳。在結(jié)球甘藍(lán)原生質(zhì)體培養(yǎng)再生植株過(guò)程中,往芽分化培養(yǎng)基中添加AgNO37.5mg／L,能明顯提高再生綠芽的分化,出芽率由51.3％提

4、高至65.2％,褐化率下降約5個(gè)百分點(diǎn)。取生長(zhǎng)狀態(tài)好的再生綠芽,以1／2MS附加IBA 0.2mg／L為生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng),能全部生根獲得完整再生植株,植株再生率為100％。
　　 3.再生植株差異性檢測(cè)表明:所獲得的QL再生植株,在外觀形態(tài)上基本與母本植株相同,僅有數(shù)株表型略有不同。流式細(xì)胞儀細(xì)胞倍性檢測(cè)結(jié)果顯示,所檢測(cè)的原生質(zhì)體再生植株,其中有79.6％為正常二倍體,9.1％為單倍體植株,6.8％為單／二倍體嵌合體植株,