Sjogren-Larsson綜合征ALDH3A2基因突變篩查及致病機理研究.pdf

1、目的：對一例 sjogren-Larsson綜合征（Sjogren-Larsson syndrome,SLS）患者的ALDH3A2基因進行突變檢測和功能學實驗。研究SLS患者ALDH3A2基因突變的類型和特點，為進一步研究ALDH3A2基因突變導致SLS的致病機理奠定基礎。
　　方法：該實驗對象為山東省青島市1例SLS患兒及其父母。采集患兒及其父母外周靜脈血并提取DNA，采用聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Rea

2、ction，PCR)擴增ALDH3A2基因編碼區(qū)的全部外顯子并測序。本實驗第二部分對在ALDH3A2基因篩查中發(fā)現的新突變(c.723C＞G)進行功能學研究。從新鮮的肝組織中提取RNA并進行逆轉錄，設計相應引物擴增ALDH3A2全編碼基因，構建ALDH3A2野生型真核表達載體，利用定點誘變試劑盒構建ALDH3A2突變體，對野生型表達載體和突變型表達載體進行正反向測序驗證。用野生型和突變型質粒分別轉染人皮膚成纖維細胞，轉染48h后收集、裂

3、解細胞，提取總蛋白，用多功能酶標儀檢測突變對脂肪醛脫氫酶活性的影響，與野生型比較分析得出突變體活性的改變。
　　結果：在受檢者ALDH3A2基因發(fā)現c.723C＞G（編碼區(qū)第723號核苷酸由C變?yōu)镚）、c.1157A>G（編碼區(qū)第1157號核苷酸由A變?yōu)镚）的復合雜合核苷酸變異，上述變異分別導致第241號氨基酸由Cys變?yōu)門rp（p.Cys241Trp）、第386號氨基酸由Asn變?yōu)镾er（p.Asn386Ser），均為錯義變異。

4、受檢者其父在位點c.723發(fā)現C＞G的雜合變異，其母該位點未見異常；受檢者其母在位點c.1157發(fā)現A>G的雜合變異，其父該位點未見異常。對野生型和突變型表達載體進行酶活檢測，與野生型相比較，c.723C＞G造成FALDH活性的降低。
　　結論：在受檢者 ALDH3A2基因所發(fā)現的復合雜合變異分別遺傳自受檢者其父母，父母均為雜合子，該變異是導致受檢者發(fā)病的致病性變異。變異c.1157A>G的致病性已經文獻報道，與Sjoegren-