貝伐單抗-PLGA緩釋微球兔眼玻璃體腔注射的藥代動(dòng)力學(xué)及藥物分布研究.pdf

1、目的：向兔眼玻璃體腔注射貝伐單抗-PLGA緩釋微球，研究其在兔眼內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布，評(píng)價(jià)該劑型眼內(nèi)應(yīng)用的安全性及應(yīng)用前景，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　 方法：15只健康新西蘭大白兔，不分雌雄，左眼注射貝伐單抗-PLGA緩釋微球混懸液(約含貝伐單抗1.25mg)，右眼注射貝伐單抗注射液0.05ml(含貝伐單抗1.25mg)，注藥前后，裂隙燈顯微鏡及直接檢眼鏡觀察眼前節(jié)及眼底。分別于注藥后3d，7d，14d，28d，42d隨機(jī)選取

2、3只兔子，抽取雙眼的房水和玻璃體各0.05ml，后摘除雙眼眼球固定于10％中性甲醛溶液中。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各樣本中貝伐單抗的濃度，應(yīng)用3p97軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，采用t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；石蠟切片行熒光免疫染色觀察藥物在組織中的分布。
　　 結(jié)果：
　　 1．裂隙燈及眼底鏡檢查：術(shù)后所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全身狀態(tài)良好，未見眼部感染、角膜混濁、白內(nèi)障、玻璃體混濁及眼底出血等并發(fā)癥。
　　 2．藥代

3、動(dòng)力學(xué)參數(shù)：注射貝伐單抗-PLGA緩釋微球混懸液(約含貝伐單抗1.25mg)的左眼與注射貝伐單抗注射液的右眼玻璃體腔內(nèi)平均藥物濃度比較：于注藥后3d分別為(249±0.13)μg/ml和(156±0.20)μg/ml;注藥后28d為左眼(45±0.14)μg/ml較右眼的（20±0.23）μg/ml高出約一倍，而注藥后42d左眼（14±0.22）μg/ml為右眼的4倍（3.6±0.19）μg/ml;左右眼房水中的平均藥物濃度于注藥后3d

4、分別為（19±0.22）μg/ml和（16±0.17）μg/ml;注藥后14d，平均濃度分別下降為(8±0.17)μg/ml和（2.3±0.04）μg/ml，術(shù)后42d左右眼濃度則分別降至（1.2±0.03）μg/ml和（0.3±0.04）μg/ml。貝伐單抗在左眼玻璃體內(nèi)藥物半衰期為9.6d，右眼為3.91d;在左眼房水中為10.2d，右眼為4.1d。左眼與右眼玻璃體及房水內(nèi)的藥物濃度的比較，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。緩釋劑

5、型的AUC0-t為注射劑型的2倍(P＜0.05)，生物利用度Fr顯著提高。
　　 3．熒光免疫組化染色：術(shù)后雙眼視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、虹膜睫狀體、房角等組織均可見藥物分布，且血管化組織分布明顯，術(shù)后3d、7d雙眼熒光閃亮，記錄為(+++)，隨時(shí)間推移，左眼術(shù)后14d、28d可見明亮熒光(++)，到術(shù)后42d仍可見較弱熒光(+)；右眼14d明亮熒光(++)，但較左眼弱，28d僅見微弱熒光(+)，42d熒光不可見（一）。
　　 結(jié)

6、論：玻璃體內(nèi)注射貝伐單抗-PLGA緩釋微球(約含貝伐單抗1.25mg)，通過組織形態(tài)學(xué)觀察，初步證明該緩釋劑型對(duì)兔眼視網(wǎng)膜無明顯毒性，該劑型的進(jìn)一步研發(fā)仍需電鏡觀察視網(wǎng)膜細(xì)胞，視網(wǎng)膜電圖檢測(cè)視網(wǎng)膜功能來驗(yàn)證其安全性。緩釋微球釋放的貝伐單抗在眼組織中的滲透及分布與溶液劑型未見明顯差別，但在注藥后14d、28d均可見注射緩釋微球眼的免疫熒光強(qiáng)度較對(duì)側(cè)眼強(qiáng)，且42d仍可見微弱熒光，提示該劑型緩慢釋放出游離的貝伐單抗并與眼內(nèi)VEGF結(jié)合，作用時(shí)