茯磚茶中降膽固醇類物質的研究.pdf

1、茯磚茶是主要生產(chǎn)于湖南的中國古老茶類，可制成鮮奶、奶茶或熬煮成清茶進行食用，研究表明其具有降血脂，降低人體膽固醇水平等保健功能。茯磚茶降血脂成分的研究主要為茶多酚，茶多糖，茶色素等，其限制了茯磚茶功能產(chǎn)品的開發(fā)及推廣應用。冠突散囊菌為茯磚茶中的主要優(yōu)勢菌種，通過自身微生物代謝影響茯磚茶的品質及風味，它是判斷茯磚茶與其它茶葉不同的重要標準之一。大量研究證明冠突散囊菌具有降血脂的作用，但目前的相關研究主要集中于冠突散囊菌調(diào)脂的宏觀效果及降脂

2、機理等方面，不能夠反映出冠突散囊菌降脂代謝的具體化學成分。同時，其它茶葉種類黑茶，普洱茶已被證明含有降血脂降血壓生物活性作用的洛伐他汀等物質，紅曲霉，土曲霉，青霉等曲霉已被證明能夠產(chǎn)生他汀類物質。而茯磚茶屬于黑茶的一種，冠突散囊菌屬于曲霉屬。
　　所以，本文通過TLC、UV、HPLC等不同檢測方法對茯磚茶及其優(yōu)勢菌種冠突散囊菌中的降膽固醇類成分他汀類物質進行定性及半定量分析，其研究結果如下所示:
　　1.以冠突散囊菌的菌落生

3、長情況為指標考察不同培養(yǎng)方式對冠突散囊菌生長的影響，將其分別接種于5％NaCl的CZG培養(yǎng)基、麩皮固體培養(yǎng)基、液體發(fā)酵培養(yǎng)基上進行菌落生長繁殖情況的觀察。結果顯示:不同培養(yǎng)基上菌落生長形態(tài)不同。冠突散囊菌在三種培養(yǎng)基上生長良好，在CZG和麩皮固體培養(yǎng)基上菌絲生長較弱，易產(chǎn)生孢子，而在液體培養(yǎng)基上菌絲生長旺盛，但產(chǎn)生孢子較弱。冠突散囊菌在5％NaCl的CZG培養(yǎng)基、麩皮固體培養(yǎng)基、液體發(fā)酵培養(yǎng)基上生長的最佳時間分別為120h、168h、9

4、6h。
　　2.采用薄層色譜法分離茯磚茶，冠突散囊菌中他汀類組分，和洛伐他汀標準品，辛伐他汀標準品進行對比性研究。選用4組展開劑，3種顯色劑對樣品進行展開效果研究。結果顯示:以氯仿∶甲醇∶水(25∶3∶1)為展開劑，碘蒸氣顯色，茯磚茶分離出7個斑點，冠突散囊菌分離出9個斑點，其中有2個明顯棕色斑點，標準品對照后確定為目標斑點，Rf值分別為0.758，0.818。因此，確定茯磚茶，冠突散囊菌中含有他汀類的可能。
　　3.選用2

5、種標準品洛伐他汀、辛伐他汀作對照，采用紫外波長掃描對實驗收集的薄層組分中的降膽固醇類物質他汀類進行測定，結果表明:標準品掃描結果顯示他汀類物質有三個吸收峰，分別為228nm，238nm，246nm，其中238nm為最大吸收波長，冠突散囊菌的薄層組分的甲醇溶解液有3個相對應的吸收峰，其表明冠突散囊菌中含有目標物質。
　　4.以保留時間為參考指標，采用高效液相分析了茯磚茶提取液、冠突散囊菌固體培養(yǎng)物提取液、薄層斑點組分提取液、柱層析無

6、色組分洗脫液、冠突散囊菌液體搖床發(fā)酵提取液中的降脂目標組分，最終確定冠突散囊菌固、液培養(yǎng)物的乙酸乙酯提取液中含有洛伐他汀，保留時間分別為4.339min、15.209min，最高含量分別為0.550mg/kg、0.616mg/kg。
　　5.冠突散囊菌產(chǎn)降膽固醇類物質洛伐他汀提取條件、高效液相色譜條件的優(yōu)化實驗、液態(tài)發(fā)酵條件及洛伐他汀穩(wěn)定性實驗的考察。(1)降膽固醇類物質洛伐他汀提取條件的優(yōu)化:選用7中提取劑，經(jīng)單因素實驗考查提取

7、劑種類，物料比，提取溫度，提取時間，提取次數(shù)對冠突散囊菌中洛伐他汀含量的影響，最終選用乙酸乙酯溶液作為提取劑，物料比1∶20，超聲波35℃下提取20min，提取次數(shù)3次，洛伐他汀含量達到最大。(2)高效液相色譜法的優(yōu)化條件為:建立測定洛伐他汀的高效液相色譜方法，最終確定使用C18色譜柱，以甲醇∶水(80∶20，v/v)為流動相洗脫，流速1mL/min，柱溫室溫。進行方法學驗證學實驗，得出該方法的線性范圍分別為0.2-3.0μg/mL，0

8、.3-3.0μg/mL，回收率、精密度、重現(xiàn)性分別為99％、1.39％、1.32％。(3)液態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化實驗:經(jīng)單因素實驗對冠突散囊菌液體發(fā)酵條件進行優(yōu)化，研究了培養(yǎng)時間，接種量，初始發(fā)酵pH值，濾液，菌絲體對洛伐他汀含量的影響。結果顯示:接種量10％，初始pH值為5.0，28℃培養(yǎng)96h，菌絲球數(shù)量較多，菌絲量較大，洛伐他汀主要生成于發(fā)酵初期，菌絲體中含量大于濾液。(4)降膽固醇類物質洛伐他汀穩(wěn)定性的研究:以峰面積為指標，考察不同