津力達改善棕櫚酸誘導的肌細胞胰島素抵抗的機制.pdf

1、胰島素抵抗(IR)是代謝性疾病如肥胖、2型糖尿病(T2DM)、高脂血癥、高血壓以及冠心病等發(fā)病的共同病理基礎，是這些代謝性疾病發(fā)生、發(fā)展的原動力。IR主要表現為胰島素對其靶組織的生理效應降低。骨骼肌是人體的運動器官，是機體葡萄糖、脂質攝取和利用的重要器官，是能量代謝的重要部位，因此，骨骼肌IR產生是人體IR形成的重要部位。研究表明脂質沉積、氧化應激、炎癥等多種因素可以導致IR的發(fā)生。
　　磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)是能量代

2、謝調節(jié)的關鍵分子，對脂肪酸的氧化過程至關重要。它表達于各種代謝相關的組織中，其中包括骨骼肌。AMPK可以被多種刺激激活，進而作用于下游分子，促進脂肪酸進入線粒體氧化。線粒體是細胞的動力工廠，是脂肪酸氧化并最終釋放能量的場所。AMPK可以作用于PGC1α及NRF1等，從而調控線粒體的氧化磷酸化相關分子，調節(jié)生物合成，影響線粒體功能。
　　中成藥津力達是由人參、黃精、蒼術、苦參、麥冬等17味中藥制成的治療2型糖尿病的復方制劑。臨床研究

3、表明其可保護胰島β細胞，改善胰島素抵抗[1]。動物實驗證實津力達可明顯降低大鼠血清甘油三酯和低密度脂蛋白水平，增加胰島素敏感性[2，3]，但其具體分子機制尚不清楚，本研究將觀察津力達對L6肌細胞胰島素抵抗及脂質沉積的影響，并探討其作用機制。
　　目的:觀察津力達對棕櫚酸誘導的L6肌細胞胰島素抵抗的改善作用，測定AMPK信號通路及線粒體功能相關分子的表達，探討其機制。
　　方法:復蘇L6成肌細胞，培養(yǎng)并誘導分化為L6肌細胞后，

4、將其隨機分為兩組:正常對照(Con)組和棕櫚酸(PA)組，棕櫚酸組采用含0.4mmol/L棕櫚酸的培養(yǎng)基孵育24h，建立胰島素抵抗細胞模型。再將棕櫚酸組隨機分為5個亞組:棕櫚酸組，津力達低（JLD-L）、中(JLD-M)、高(JLD-H)劑量組和吡格列酮(PIO)組。上述藥物干預48h后，采用葡萄糖氧化酶法分別測定各組細胞培養(yǎng)基中葡萄糖攝取率，評價細胞的胰島素敏感性;收集細胞測定甘油三酯，游離脂肪酸含量;Real-Time PCR檢測L

5、6肌細胞AMPK、ACC、GLUT4、CPT1、NRF1、COXⅣ、ACADM、PPARα、PPARγ和PGC-1α的mRNA表達;Western Blot檢測L6肌細胞AMPK、P-AMPK、ACC、P-ACC、CPT1、GLUT4和PGC1α的蛋白表達。
　　結果:
　　1、L6肌細胞胰島素敏感性比較:棕櫚酸組細胞葡萄糖攝取率較正常對照組顯著降低(P＜0.05)，津力達各劑量組及吡格列酮干預后葡萄糖攝取率較棕櫚酸組顯著增

6、加（均P＜0.05）。
　　2、L6肌細胞脂質含量的比較:棕櫚酸組甘油三酯及游離脂肪酸含量較正常對照組顯著增加（均P＜0.05），津力達各劑量組及吡格列酮干預后甘油三酯及游離脂肪酸含量較棕櫚酸組顯著降低（均P＜0.05）。
　　3、L6肌細胞AMPK通路信號分子的表達:AMPK及ACC的mRNA及蛋白表達在各組之間沒有差異（均P＞0.05）。與正常對照組相比，棕櫚酸組P-AMPK及P-ACC的蛋白表達顯著下調（均P＜0.05

7、），與棕櫚酸組相比，津力達組及吡格列酮干預后P-AMPK及P-ACC的蛋白表達顯著上調（均P＜0.05）。與正常對照組相比，棕櫚酸組CPT1和GLUT4的mRNA及蛋白表達均顯著下調（均P＜0.05）;與棕櫚酸組相比，津力達各劑量組及吡格列酮干預后CPT1及GLUT4的mRNA及蛋白表達均顯著上調（均P＜0.05）。
　　4、L6肌細胞線粒體功能相關分子的基因及蛋白表達:棕櫚酸組PGC-1α、NRF1、PPARα、PPARγ、CO

8、XⅣ及ACADM的mRNA表達明顯下調(P＜0.05)，津力達各劑量組及吡格列酮組顯著上調了PGC-1α、PPARα、PPARγ及ACADM的mRNA表達（均P＜0.05）。津力達中劑量組顯著上調了COXIVmRNA的表達（均P＜0.05），而津力達低、高劑量組及吡格列酮組未能顯著上調COXIVmRNA的表達。此外，津力達各劑量組及吡格列酮組均未上調NRF1mRNA的表達。PGC-1α蛋白表達同基因表達一致，在棕櫚酸組其表達顯著下調（均

9、P＜0.05），上述藥物干預后其表達顯著上調(均P＜0.05)。
　　結論:
　　1、棕櫚酸孵育可以誘導L6肌細胞胰島素抵抗，津力達干預可以改善L6肌細胞的胰島素抵抗程度，而且這種作用與胰島素增敏劑吡格列酮相當。
　　2、津力達逆轉了棕櫚酸孵育導致的L6肌細胞AMPK信號通路及線粒體功能相關分子表達的下降，改善了細胞的脂質沉積。
　　3、津力達能夠通過激活AMPK，改善線粒體功能，增加脂肪酸氧化，促進葡萄糖的攝取