蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究在樂果脅迫下牡蠣生殖腺和鰓差異表達的蛋白質(zhì).pdf

1、樂果(Dimethoate，DM)是目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中使用最為廣泛的有機磷農(nóng)藥之一。的健康與生存。有機磷農(nóng)藥對人類影響最大是大腦，目前已進行大量科學(xué)研究，并有詳細的研究報道，但對水生生物的生殖與呼吸系統(tǒng)的毒理學(xué)研究并不多。本論文以牡蠣為實驗物種，以它的生殖腺和鰓為實驗材料，選擇DM為有機磷農(nóng)藥為污染物和諸多分析技術(shù)研究DM對牡蠣生殖腺和鰓所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。
　　在濃度為1.0mg/L，2.0mg/L，5.0mg/L樂果，脅迫48h

2、的條件下，牡蠣的生殖腺和鰓器官中均能檢測出不同濃度的樂果殘留量，且組織中樂果殘留量隨著環(huán)境樂果濃度增高而呈現(xiàn)上升趨勢。這些現(xiàn)象說明了樂果能夠在富集于牡蠣，并遷移且累積在鰓和生殖腺中，影響到鰓和生殖腺執(zhí)行正常的生理功能，可能誘導(dǎo)出許多應(yīng)激功能蛋白。對牡蠣鰓和生殖腺中的有機磷農(nóng)藥的過度使用造成了嚴重的環(huán)境污染，土壤中殘留的有機磷農(nóng)藥可通過河流的擴散作用，最終匯入大海，富集于牡蠣等各種近海養(yǎng)殖水產(chǎn)品體內(nèi)，并通過食物鏈途徑影響到人類抗氧化酶過氧

3、化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活性進行分析，實驗結(jié)果表明，在2mg/L樂果的脅迫下，隨著脅迫時間的延長，鰓和生殖腺中的CAT酶和SOD酶活性都呈現(xiàn)出先上升而后降低的趨勢，這說明了樂果能夠引發(fā)牡蠣的應(yīng)激反應(yīng)，使牡蠣鰓和生殖腺中抗氧化酶活性的提高，并引發(fā)一系列的后續(xù)效應(yīng)，誘導(dǎo)差異蛋白的產(chǎn)生。
　　采用蛋白質(zhì)組學(xué)及相關(guān)的分析技術(shù)篩選出在樂果脅迫前后，牡蠣生殖腺和鰓中表達的應(yīng)激差異蛋白.在生殖腺中已鑒定出12個差異蛋白，其中

4、9個蛋白表達量下調(diào)，3個蛋白表達量上調(diào);在鰓中已鑒定出14個差異蛋白，其中11個蛋白表達量下調(diào)，3個蛋白表達量上調(diào)。針對這些差異蛋白的生理功能進行檢索比對和文獻查閱，總結(jié)出主要影響的是參與氧化應(yīng)激、能量代謝、DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄、細胞周期調(diào)控等過程有關(guān)重要功能蛋白，其中氧化應(yīng)激相關(guān)的蛋白，如HSTF等表達量上調(diào)，而FAD依賴的氧化還原酶和Cavortin表達量卻下調(diào)。DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白中，AGT表達量上調(diào)，Ribosomal S2表達

5、量下調(diào)。細胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白Cdc2和Megator表達量下調(diào)，14-3-3蛋白表達量上調(diào)。能量代謝相關(guān)的蛋白中，Malate dehydrogenase表達量下調(diào)，而Glutamine synthetase表達量上調(diào)。采用Real-time PCR技術(shù)進一步佐證Cavortin、14-3-3、Ribosomal S2，Malate dehydrogenase等差異蛋白的mRNA表達量的變化趨勢，其中這些差異蛋白對應(yīng)的mRNA表達量變化