噬肺軍團菌編碼的泛素連接酶的生物化學性質及生物學功能研究.pdf

1、噬肺軍團菌(Legionella pneumophila)在感染宿豐細胞過程中，能夠干擾宿主細胞的膜泡運輸體系，募集包括源于內質網的光滑膜泡、線粒體和核糖體等細胞器，并逃避吞噬泡的成熟過程，避免與溶酶體的融合降解，隨后在經過修飾的吞噬泡內復制增殖并裂解宿主細胞，進而導致疾病的產生。噬肺軍團菌的Dot/Icm四型分泌系統(tǒng)對于其對宿豐細胞內的感染非常重要，該四型分泌系統(tǒng)突變的噬肺軍團菌進入宿主細胞后所形成的吞噬泡很快經內體成熟途徑與溶酶體融

2、合而被降解。Dot/Icm系統(tǒng)可以分泌許多細菌效應蛋白進入宿主細胞內，但是目前對這些效應蛋白還知之甚少。 本課題通過對噬肺軍團菌基因組數(shù)據的生物信息學分析，我們發(fā)現(xiàn)噬肺軍團菌基因組編碼的3個蛋白Lpg2830、Lpg2144和Lpg0171分別含有真核細胞所特有的U-Box(Lpg2830)和F-Box(Lpg2144和Lpg0171)結構域，這兩個結構域均廣泛存在于真核細胞的泛素系統(tǒng)中，能夠單獨或與其它細胞成分形成復合物催化泛

3、素修飾反應。在此，通過實驗我們驗證了Lpg2830在體內體外均擁有泛素連接酶的活性，可以利用UbcH5進行自泛素化修飾，Lpg2144與Lpg0l7l均能夠形成SCF復合物，SCF復合物在真核細胞中能夠將底物泛素化修飾并被蛋白酶體識別降解。Lpg2830、Lpg2144與Lpg0171均能夠通過四型分泌系統(tǒng)進入宿主細胞，它們通過各自C端的不同定位信號定位于特定的細胞結構，在Cos7細胞中Lpg2830與Lpg0171定位于核周內質網結構