葡萄球菌腸毒素A和黑色素瘤抗原A3構(gòu)建的真核共表達(dá)質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)抗喉癌的效應(yīng).pdf

1、1 SEA和喉癌MAGE-A3構(gòu)建的真核質(zhì)粒pMAGEA3-IRES-SEA經(jīng)過(guò)電穿孔轉(zhuǎn)染在小鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄
　　目的：檢測(cè)真核質(zhì)粒pMAGEA3-IRES-SEA經(jīng)過(guò)電穿孔轉(zhuǎn)染在小鼠中的轉(zhuǎn)錄。
　　方法：將葡萄球菌腸毒素A（staphylococcal endotoxin A，SEA）和喉癌來(lái)源的黑色素瘤抗原A3（melanoma-associated antigen A3，MAGE-A3），構(gòu)建成基因共表達(dá)的真核質(zhì)粒pMA

2、GEA3-IRES-SEA。將pMAGEA3-IRES-SEA用電轉(zhuǎn)染的方法免疫BALB/C小鼠單側(cè)股四頭肌，每?jī)芍芤淮?，每次注?0μg，共免疫三次。末次免疫兩周后，取注射部位組織，用熒光定量 PCR（qRT-PCR）法檢測(cè)目的基因在注射部位肌肉中的轉(zhuǎn)錄情況。
　　結(jié)果：在實(shí)驗(yàn)小鼠注射部位的骨骼肌內(nèi)檢測(cè)到SEA、MAGE-A3基因轉(zhuǎn)錄mRNA。
　　結(jié)論：所構(gòu)建的 pMAGEA3-IRES-SEA真核表達(dá)質(zhì)粒，可通過(guò)電轉(zhuǎn)染

3、的方式，在小鼠體內(nèi)能有效地轉(zhuǎn)錄。這為研究該質(zhì)粒通過(guò)小鼠的體內(nèi)轉(zhuǎn)錄蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫、體液免疫來(lái)清除喉癌，奠定了理論基礎(chǔ)。
　　2喉癌來(lái)源黑色素瘤抗原的真核質(zhì)粒在小鼠黑色素瘤細(xì)胞模型的表達(dá)
　　目的：測(cè)定 pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核質(zhì)粒在小鼠黑色素瘤 B16細(xì)胞的穩(wěn)定表達(dá)，建立表達(dá)MAGE-A3腫瘤細(xì)胞模型。
　　方法：將喉癌來(lái)源的黑色素瘤抗原A3（melanoma-associated ant

4、igen A3，MAGE-A3）構(gòu)建成真核質(zhì)粒pIRES2-EGFP/MAGE-A3，脂質(zhì)體法將pIRES2-EGFP/MAGE-A3轉(zhuǎn)染小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞，G418篩選陽(yáng)性克隆，然后熒光顯微鏡檢測(cè)陽(yáng)性克隆中增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（Enhanced green fluorescent protein，EGFP）的表達(dá)，熒光定量PCR（qRT-PCR）檢查MAGE-A3在B16細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄。
　　結(jié)果： pIRES2-EGFP/MA

5、GE-A3真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞后篩選得到陽(yáng)性克隆，可見(jiàn)融合蛋白表達(dá)產(chǎn)生明亮的綠色熒光，qRT-PCR可檢測(cè)到MAGE-A3 mRNA的轉(zhuǎn)錄。
　　結(jié)論： pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體法能有效轉(zhuǎn)染，并在B16穩(wěn)定表達(dá)，成功建立了MAGE-A3腫瘤細(xì)胞模型。
　　3葡萄球菌腸毒素A和黑色素瘤抗原A3構(gòu)建的真核質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)抗喉癌的效應(yīng)
　　目的：觀察真核質(zhì)粒 pMAGEA3-IRES-SEA免

6、疫小鼠后，鼠脾淋巴細(xì)胞對(duì)喉癌細(xì)胞模型B16/MAGE-A3的殺傷作用。
　　方法：先期將葡萄球菌腸毒素A（staphylococcal endotoxin A，SEA）和喉癌來(lái)源的黑色素瘤抗原A3（melanoma-associated antigen A3，MAGE-A3），構(gòu)建成基因共表達(dá)的真核質(zhì)粒pMAGEA3-IRES-SEA，用電轉(zhuǎn)染的方法免疫BALB/C小鼠單側(cè)股四頭肌。末次免疫兩周后，取脾分離淋巴細(xì)胞，與B16/MA