EWS-FLI1融合蛋白在尤文肉瘤細胞的表達分布及其融合區(qū)抗原表位的預測.pdf

1、目的: 明確EWS-FLI1融合蛋白在EWS細胞中的分布情況；預測EWS-FLI1蛋白融合區(qū)的T細胞表位、B細胞表位，為下一步實驗提供實驗依據(jù)。 方法: 將尤文肉瘤細胞株A673進行傳代培養(yǎng)，制作細胞爬片，用FLI1特異性單克隆抗體進行免疫細胞化學染色，分析融合蛋白EWS-FLI1在細胞的表達分布，并對其表達分布情況進行統(tǒng)計。 采用生物信息學方法，應用BIMAS、SYFPEITHI、Predep、Immu

2、ne Epitope Database and Analysis Resource(IEDB)等預測軟件，預測EWS-FLI1融合區(qū)最有可能的HLA-A*0201限制性細胞毒性T細胞(cytotoxic T-cell epitopes，CTL)表位。 采用SOPM/SOPMA、Chou-Fasman、Karplus-Schulz、Parker、Emini和Kolaskar-Tongaonkar預測法分析EWS-FLI1融合區(qū)的二

3、級結(jié)構(gòu)、氨基酸的親水性、表面可及性、抗原指數(shù)，綜合各項分析，預測EWS-FLI1融合區(qū)可能的B細胞表位。 結(jié)果: 免疫細胞化學染色實驗顯示，EWS-FLI1融合蛋白陽性染色位于細胞核的EWS細胞在所有EWS細胞的平均構(gòu)成比為84.78％，位于細胞漿者為11.71％，位于細胞膜者為3.51％。 結(jié)合4種T細胞表位預測軟件，預測出最有可能的：EWS-FLI1融合區(qū)HLA-A*0201限制性CTL表位共計9個。