ERp46在棕櫚酸誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的保護(hù)作用及Exendin-4的干預(yù)研究.pdf

1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是胰島β細(xì)胞功能障礙和胰島素抵抗發(fā)生的重要分子機(jī)制之一。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)新發(fā)現(xiàn)的蛋白ERp46（Endoplasmic reticulum protein46）高表達(dá)于胰島組織，研究發(fā)現(xiàn)在胰島β細(xì)胞糖毒性中，ERp46可一定程度上改善胰島細(xì)胞功能，但其生物學(xué)功能未完全明確。目前，尚無(wú)ERp46在胰島細(xì)胞脂毒性中作用的報(bào)道。本文旨在探討ERp46是否在飽和脂肪酸棕櫚酸所致的胰島β細(xì)胞毒性損傷中發(fā)揮保護(hù)作用，觀察胰高血糖素樣肽-1（The

2、incretin hormone glucagon-like peptide-1，GLP-1）長(zhǎng)效受體激動(dòng)劑Exendin-4對(duì)胰島β細(xì)胞脂毒性的干預(yù)作用及對(duì)其ERp46表達(dá)的影響，為2型糖尿?。═ype2 diabetes，T2DM）提供可能的干預(yù)與治療新靶點(diǎn)。本研究分為三部分：
　　第一部分：棕櫚酸對(duì)βTC6細(xì)胞的毒性作用及對(duì)ERp46和胰島素（Insulin）表達(dá)的影響
　　本部分研究觀察飽和脂肪酸棕櫚酸對(duì)小鼠胰島素瘤

3、βTC6細(xì)胞株增殖活性、Insulin及ERp46表達(dá)的影響。應(yīng)用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的變化，用Real-tine PCR和Western blot方法檢測(cè)ERp46及Insulin在mRNA和蛋白水平的變化。結(jié)果顯示，棕櫚酸可時(shí)間-劑量依賴(lài)性降低細(xì)胞增殖活性，減少ERp46及Insulin的表達(dá)，提示ERp46可能與棕櫚酸所致的βTC6細(xì)胞脂毒性損傷密切相關(guān)。
　　第二部分：ERp46在棕櫚酸所致βTC6細(xì)胞毒性損傷中的保

4、護(hù)作用
　　為了探討ERp46在高棕櫚酸條件下對(duì)βTC6細(xì)胞功能的可能作用，本文應(yīng)用siRNA技術(shù)抑制ERp46的表達(dá)，應(yīng)用Real-time PCR及Western blot方法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白及Insulin表達(dá)的變化、用放射免疫法檢測(cè)細(xì)胞葡萄糖刺激的胰島素分泌（Glucose-stimulated insulin secretion，GSIS）的改變、AnnexinⅤ-PI雙染法及TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率的變化。結(jié)果

5、發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)NC組相比，NC組用0.5mM棕櫚酸干預(yù)細(xì)胞24h后，細(xì)胞增殖活性降低，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白ATF6α、PERK、IRE1α、JNK、CHOP、Caspase12表達(dá)量增加，Insulin合成量及GSIS明顯下降，細(xì)胞凋亡率顯著增高。在高棕櫚酸條件下，ERp46 siRNA組較NC組細(xì)胞增殖活性下降，ATF6α、PERK、IRE1α、JNK、CHOP、Caspase12表達(dá)量上調(diào)，Insulin合成量及 GSIS明顯下降，細(xì)胞

6、凋亡率亦顯著增高。提示ERp46對(duì)βTC6細(xì)胞脂毒性損傷可能起保護(hù)作用，可改善胰島β細(xì)胞功能。
　　第三部分：Exendin-4對(duì)βTC6細(xì)胞ERp46表達(dá)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響
　　本部分實(shí)驗(yàn)觀察Exendin-4對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的保護(hù)作用，及其對(duì)ERp46表達(dá)的影響。應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)ERp46及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)記蛋白CHOP、Caspase12及P-JNK表達(dá)的變化。結(jié)果顯示，在一定的濃度范

7、圍內(nèi)，隨著Exendin-4濃度的上升，ERp46表達(dá)量逐漸上調(diào)，CHOP、Caspase12及P-JNK表達(dá)逐漸減少，且呈劑量依賴(lài)性。提示Exendin-4可通過(guò)增強(qiáng)保護(hù)性分子伴侶ERp46的表達(dá)，緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激三條通路的應(yīng)激狀態(tài)來(lái)減輕細(xì)胞的脂毒性損傷。
　　綜上所述，ERp46可一定程度上減輕棕櫚酸所誘導(dǎo)的βTC6細(xì)胞毒性損傷，改善細(xì)胞功能，對(duì)β細(xì)胞起保護(hù)性作用。GLP-1長(zhǎng)效受體激動(dòng)劑Exendin-4可劑量依賴(lài)性增加ERp