定量檢測HPPCn的雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立及初步應用.pdf

1、目的:HPPCn(Hepatopoietin Cn)是一個來源于肝臟刺激物(HSS)的新型肝細胞刺激因子，可以促進肝細胞增殖及肝臟的再生，已取得的研究結果表明HPPCn及其激活的下游信號系統(tǒng)與肝癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關，可能成為腫瘤治療的新靶點。為了進一步鑒定研究HPPCn在生物學方面的特性和功能，分析在肝炎、肝硬化及肝癌等多種肝臟方面疾病發(fā)生過程中HPPCn的動態(tài)變化以及與疾病的相關性，需要獲得更多的抗HPPCn抗體，為此本研究擬建立定

2、量檢測HPPCn的雙抗體夾心ELISA方法。
　　 方法:用重組HPPCn蛋白對雌性BABL/c小鼠進行免疫刺激，收集抗血清。通過PEG-1500將脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞Sp2/0細胞進行融合，形成雜交瘤細胞，采用雜交瘤技術獲得8個抗HPPCn單克隆抗體(mAb)，并經(jīng)SDS-PAGE和Western Blot等方法對純化抗體的特性進行鑒定。純化的8個抗體應用鍍金芯片法進行配對檢測;通過方陣滴定法確定酶標抗體和包被抗體的最佳工作

3、濃度。按照純化的HPPCn抗原作為標準品建立標準曲線。
　　 結果:我們得到了8株可以穩(wěn)定分泌抗人HPPCn抗體的雜交瘤細胞株，分別是Ab_3-3-3, Ab_65-29-6, Ab_9-34-1, Ab_7-8-10, Ab_4-8-12, Ab_2-30-23,Ab_12-27-23，Ab_11-11-12。得到的8種抗體均可以特異結合HPPCn抗原，其中與細胞中HPPCn結合的特異性最好的是Ab_65-29-6。通過抗體配