新型Src激酶抑制劑FB2的抗前列腺癌作用及機(jī)制研究.pdf

1、以Src為代表的Src家族激酶(Src family kinase，SFK)是一類非受體型酪氨酸激酶。Src作為人類首先發(fā)現(xiàn)的原癌蛋白，參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移等多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。此外，Src在多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞及組織中過表達(dá)或活性過高，其中包括：前列腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌及胃癌等。因此，近年來人們已將Src激酶視為腫瘤治療的重要靶點(diǎn)之一，其抑制劑已經(jīng)在臨床腫瘤治療中發(fā)揮重要作用。本文對(duì)新型Src激酶

2、抑制劑FB2的抗前列腺癌作用及機(jī)制進(jìn)行探討。 體外藥效學(xué)研究結(jié)果表明，F(xiàn)B2對(duì)多種不同組織來源的腫瘤細(xì)胞有明顯的生長(zhǎng)抑制作用，其中包括：人前列腺癌細(xì)胞DU145、PC—3；人乳腺癌細(xì)胞MDA—MB—231；人肺腺癌細(xì)胞A549；人卵巢癌細(xì)胞SK—OV—3；人黑色素瘤細(xì)胞A—375。MTT法測(cè)得其作用72h的半數(shù)抑制濃度IC50在17nM～73nM之間。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，Src激酶與人前列腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系較為密切，因此本論文將兩株前列

3、腺癌細(xì)胞DU145和PC—3作為實(shí)驗(yàn)研究的重點(diǎn)。SRB試驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)B2明顯抑制DU145和PC—3細(xì)胞的增殖，作用72h的半數(shù)生長(zhǎng)抑制濃度GI50分別為14.3nM和7.1nM；集落形成試驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)B2作用濃度在1nm即可明顯抑制DU145和PC—3細(xì)胞集落形成；整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)B2能夠抑制人前列腺癌細(xì)胞PC—3裸鼠異體移植瘤的生長(zhǎng)。灌胃給予18、36、72mg/kg/d，每周6天，26天后處死動(dòng)物，F(xiàn)B2對(duì)PC—3異體

4、移植瘤的瘤重抑制率分別為45.5％、51.4％和59.4％，呈明顯量效關(guān)系。 在作用機(jī)制研究中，細(xì)胞周期結(jié)果表明，F(xiàn)B2作用24h使DU145和PC—3細(xì)胞發(fā)生Gi期阻滯，并呈明顯量效關(guān)系；FB20.1μM作用24h對(duì)細(xì)胞形態(tài)有一定的影響，細(xì)胞間接觸降低；粘附試驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)B21μM預(yù)處理30min，可明顯抑制DU145和PC—3細(xì)胞與人工基底膜成分Matrigel的粘附；劃痕—愈合試驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)B21μM持續(xù)作用12h，明

5、顯抑制DU145側(cè)向遷移能力；明膠酶譜法結(jié)果表明，F(xiàn)B21μM作用24h，在一定程度上降低人纖維肉瘤細(xì)胞HT—1080分泌MMP—2及MMP—9以及人前列腺癌細(xì)胞DU145分泌MMP—1。 除此之外，Western blot結(jié)果表明，F(xiàn)B21μM作用30min明顯降低DU145和PC—3細(xì)胞內(nèi)p—Src(Y416)表達(dá)水平而不影響Src蛋白的表達(dá)水平。Western blot及免疫組化分析PC—3細(xì)胞異體移植瘤組織塊中p—Src