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文檔簡介
1、目的:Docetaxel是治療激素非依賴性前列腺癌的一線化療藥物,通過促進細胞內(nèi)微管聚集,誘導細胞阻滯于G2/M期并誘導細胞凋亡揮抗腫瘤效果。在臨床實際應用過程中Docetaxel對激素非依賴性前列腺癌顯示出明顯的治療效果,但也存在出現(xiàn)獲得性耐藥等?,F(xiàn)難題。因此,基于公認的藥物靶點,尋找具有更強抗腫瘤活性的藥物一直是本領域的研究重點和熱點。前期研究顯示新型紫杉烷類化合物Lx2-32c對微管蛋白的促聚合能力顯著強于Docetaxel,提示
2、Lx2-32c可能對前列腺癌顯示出更強的抗增殖活性。本研究將通過較系統(tǒng)的體外、體內(nèi)抗腫瘤模型明確Lx2-32c對前列腺癌的生長抑制活性,并在此基礎之上探索其發(fā)揮作用的機制。
方法:1、使用MTT法檢測Lx2-32c對細胞增殖的影響,并計算半數(shù)抑制濃度(IC50);2、使用Honchest33324標記細胞核或使用免疫熒光染色法標記細胞內(nèi)的微管,在熒光顯微鏡下觀察Lx2-32c對細胞核形態(tài)及細胞內(nèi)微管的影響;3、使用流式細胞儀檢
3、測并分析化合物對細胞周期及細胞凋亡的影響;4、使用Western blot法檢測Lx2-32c對細胞內(nèi)凋亡相關蛋白ATF3、P53及細胞凋亡標記物cleaved-PARP表達的影響;5、建立異體移植瘤模型檢測Lx2-32c對前列腺癌細胞體內(nèi)移植瘤生長的影響;6、使用siRNA沉默LNCaP細胞內(nèi)的ATF3,觀察ATF3對Lx2-32c細胞增殖抑制活性的影響。結果:1、MTT實驗結果顯示:Lx2-32對LNCaP、PC3、DU145、RM
4、-1前列腺癌細胞的IC50值分別為2.57±0.71 nM、2.94±0.57 nM、7.17±1.28 nM及4.22±0.39 nM;Docetaxel對上述細胞的IC50值分別為4.41±1.64 nM、9.37±2.30 nM、11.89±1.56 nM、12.45±2.89 nM。表明Lx2-32c對多種前列腺癌均具有明顯的增殖抑制能力;2、熒光顯微鏡觀察結果顯示:與對照組細胞相比,Lx2-32c組及Docetaxel組細胞的
5、細胞核出現(xiàn)明顯的碎裂現(xiàn)象;Lx2-32c組及Docetaxel組細胞微管形態(tài)出現(xiàn)異常變化,細胞內(nèi)微管呈束狀分布,少數(shù)細胞縮小成明亮的綠色小球狀。表明Lx2-32c具有促進前列腺癌細胞微管聚集并誘導凋亡的能力。3、流式細胞儀分析結果顯示:與對照組細胞相比,Lx2-32c及Docetaxel作用24 h后處于G2/M期細胞的比例明顯升高;作用48 h后處于sub-G0期細胞的比例顯著增高。表明Lx2-32c具有阻滯前列腺癌細胞周期于G2/M
6、期的能力。4、Western blot結果顯示:與對照組細胞相比,Lx2-32c及Docetaxel可以顯著升高細胞內(nèi)cleaved-PARP蛋白的表達;并可誘導LNCaP細胞內(nèi)ATF3及P53的表達升高。表明Lx2-32c具有誘導細胞凋亡的能力。5、在小鼠前列腺癌細胞RM-1體內(nèi)移植瘤模型中,Docetaxel在10 mg/kg劑量的腫瘤抑制率為47%;Lx2-32c在10 mg/kg、20 mg/kg及30 mg/kg劑量的腫瘤抑制
7、率分別為9%、60%、61%。表明Lx2-32c具有抑制RM-1在C57BL/6小鼠體內(nèi)增殖的能力。6、在人前列腺癌細胞LNCaP及PC3的Babl/c裸鼠異體移植瘤模型中,Docetaxel在10 mg/kg劑量對兩種模型的腫瘤抑制率分別為94%和90%;Lx2-32c在10 mg/kg及20 mg/kg劑量對兩種模型的腫瘤抑制率分別為89%、98%和88%、90%。表明Lx2-32c具有抑制LNCaP、PC3在Babl/c裸鼠體內(nèi)增
8、殖的能力。7、MTT結果顯示:下調LNCaP細胞內(nèi)ATF3蛋白的表達對Lx2-32c細胞毒性無顯著影響。表明ATF3在Lx2-32c抗增殖作用中并不發(fā)揮主要作用。
結論:1、Lx2-32c在體外、體內(nèi)對前列腺癌細胞均顯示出較強的增殖抑制活性,相同實驗條件下與Docetaxel相比,體外活性更強、體內(nèi)活性相當。2、Lx2-32c的抗腫瘤作用與它促進細胞內(nèi)微管聚集,進而誘導細胞阻滯于G2/M期并誘導細胞凋亡有關。
研究創(chuàng)
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