菝葜抗良性前列腺增生和前列腺癌活性及其作用機制研究.pdf

1、良性前列腺增生(Benign Prostatic Hyperplasia, BPH)及前列腺癌(Prostate Cancer, PCa)是老年男性中的常發(fā)病，隨著我國逐漸步入老齡化社會，BPH和PCa的發(fā)病率會持續(xù)增高，將成為我國醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域的一個嚴重挑戰(zhàn)。目前對于BPH和 PCa的治療手段，治療效果還不能令人滿意，因此，尋找新的治療藥物一直是研究人員關(guān)注的熱點。
　　菝葜(Smilax china L.)，又名金剛藤，在我國已

2、有悠久的應用歷史，并已被《中國藥典》2010年版所收錄。在實驗室前期研究中，發(fā)現(xiàn)菝葜提取物對細菌性及非細菌性慢性前列腺炎均具有很好的治療效果，基于炎癥在其他前列腺疾病中扮演重要角色，為了探索其對其他前列腺疾病的治療效果，本論文主要開展了以下兩方面的研究：菝葜及其活性成分抗BPH及作用機制研究；菝葜中主要活性化合物薯蕷皂苷體外及體內(nèi)抗PCa活性及作用機制研究。
　　第一部分 菝葜抗BPH活性及其作用機制研究
　　在本部分的實驗

3、中，我們首先對菝葜抗BPH活性部位進行了篩選。運用丙酸睪酮誘導去勢大鼠前列腺增生模型，每日灌胃給予菝葜不同提取部位，連續(xù)三周。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，菝葜正丁醇部位、水部位及大孔樹脂部位能顯著降低前列腺濕重、前列腺指數(shù)及血清PACP含量，病理組織檢查發(fā)現(xiàn)，這三個部位也能改善BPH組織病理形態(tài)，并且菝葜大孔樹脂部位效果最佳。通過這一小節(jié)的實驗發(fā)現(xiàn)，菝葜提取物能夠有效抑制前列腺增生，其中菝葜大孔樹脂部位為抗BPH活性部位。
　　接著，對菝葜大孔樹脂

4、部位抗BPH的治療效果及作用機制做了進一步研究。采用丙酸睪酮誘導去勢大鼠前列腺增生模型，灌胃給予大鼠大孔樹脂部位(300,600 mg/kg)，連續(xù)三周。實驗結(jié)果表明，菝葜大孔樹脂部位能降低前列腺指數(shù)，改善BPH組織病理形態(tài)，降低BPH大鼠血清中DHT及IL-1β、TNF-α、IL-6的含量；另外大孔樹脂部位還能降低VEGF、Bcl-2及PCNA的表達，增加Bax的表達。綜上所述，菝葜大孔樹脂部位通過抑制DHT的生成，降低炎癥因子的含量

5、，減少生長因子VEGF的表達以及調(diào)節(jié)凋亡和增殖來共同發(fā)揮其抗BPH作用。
　　最后，我們對菝葜大孔樹脂部位主要化合物薯蕷皂苷元抗BPH進行了藥效學及作用機制研究。采用丙酸睪酮誘導大鼠BPH模型，灌胃給予大鼠50、100mg/kg薯蕷皂苷元，連續(xù)三周。實驗結(jié)果顯示，薯蕷皂苷元能降低前列腺指數(shù)、血清PSA含量及前列腺組織中MDA含量，增加SOD、GSH-Px含量。病理學檢查發(fā)現(xiàn)，薯蕷皂苷元能顯著改善BPH組織形態(tài)。并且，薯蕷皂苷元能降

6、低炎癥因子IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表達，以及降低Bcl-2，增加Bax、p53的表達。實驗結(jié)果說明，薯蕷皂苷元能有效抑制BPH，其作用可能與改善BPH組織中的氧化應激狀態(tài)、降低炎癥因子的表達及促進細胞凋亡等有關(guān)。
　　第二部分 薯蕷皂苷體外及體內(nèi)抗前列腺癌活性及作用機制研究
　　在本部分的實驗中，先對薯蕷皂苷體外抑制前列腺癌LNCaP和PC-3細胞活性及其作用機制進行了研究。MTT比色法結(jié)果顯示，薯蕷皂苷能

7、濃度依賴性及時間依賴性地抑制LNCaP和PC-3細胞活性。Hoechst33342熒光染色觀察細胞凋亡形態(tài)顯示，經(jīng)薯蕷皂苷作用24 h后，LNCaP和PC-3細胞均呈現(xiàn)出凋亡形態(tài)，如細胞核固縮，染色質(zhì)變濃，以及出現(xiàn)凋亡小體等。流式細胞儀Annexin V-FITC/PI染色法檢測結(jié)果顯示，薯蕷皂苷能顯著增加LNCaP和PC-3細胞凋亡比例。流式細胞儀JC-1染色法檢測線粒體膜電位結(jié)果表明，薯蕷皂苷能誘導LNCaP和PC-3細胞線粒體膜電

8、位降低。Western blot檢測結(jié)果顯示，LNCaP和PC-3細胞經(jīng)薯蕷皂苷作用24h后，細胞色素c從線粒體內(nèi)釋放入胞漿中，procaspase-9、procaspase-3及Bcl-2表達降低，而cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及Bax表達增加。實驗結(jié)果說明，薯蕷皂苷對LNCaP和PC-3兩種前列腺癌細胞均有顯著的生長抑制作用，而其作用機制可能與誘導線粒體功能紊亂，促進caspase-9及ca

9、spase-3活化，進而促進細胞凋亡有關(guān)。
　　接著，運用前列腺癌裸鼠移植瘤模型，對薯蕷皂苷抗前列腺癌活性進行了體內(nèi)研究。待移植瘤生長至約5×5mm時，每隔一天腹腔注射15及30mg/kg薯蕷皂苷。給藥三周后，實驗結(jié)果顯示，薯蕷皂苷能抑制前列腺癌移植瘤生長，相對腫瘤體積顯著降低。經(jīng)病理學檢查發(fā)現(xiàn)，薯蕷皂苷對血液系統(tǒng)、肝腎功能均無明顯毒性，病理切片觀察發(fā)現(xiàn)，薯蕷皂苷治療組腫瘤組織中出現(xiàn)大量細胞凋亡、壞死。TUNEL法結(jié)果顯示，薯蕷皂