人canstatin基因轉(zhuǎn)染對(duì)體外卵巢癌HO-8910PM及SKOV-3細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得我校或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名I縊I壘耋日期：2紀(jì)蘭：【￡中國(guó)

2、醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論

3、文作者簽名：型查莖指導(dǎo)教師簽名：至出：量2日中文論著摘要人canstatin基因轉(zhuǎn)染對(duì)體外卵巢癌HO8910PM及SKOv3細(xì)胞增殖與凋亡的影響目的canstatin是新近發(fā)現(xiàn)的一種血管生成抑制因子，本試驗(yàn)將以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC作為對(duì)照，研究canstatin在體外對(duì)卵巢癌細(xì)胞HO8910PM，SKOV3生物學(xué)行為(增殖于凋亡)是否有影響。方法委托專業(yè)生物公司人工合成人canstatin基因片段，經(jīng)DNA測(cè)序證實(shí)后，將攜帶目的基

4、因片段的質(zhì)粒PUC57和大腸桿菌交由慢病毒構(gòu)建公司，委托其構(gòu)建并包裝出帶有綠色熒光蛋白基因GFP的慢病毒LecanGFP，同時(shí)包裝不含目的基因的空載體病毒LeGFP作為對(duì)照。用人canstatin基因重組慢病毒載體LecanGFP感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC，卵巢癌細(xì)胞HO8910PM，SKOV3，借助GFI的熒光表達(dá)觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況。感染成功后，RealtimePCR法檢測(cè)HUVEC細(xì)胞及卵巢癌細(xì)胞中目的基因canstatinmRN

5、A的表達(dá)。通過(guò)MFr法及流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)研究canstatin對(duì)上述細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。結(jié)果用重組慢病毒載體LecanGFP感染人臍靜脈細(xì)胞HUVEC及卵巢癌細(xì)胞系HO8910PM，SKOV3，當(dāng)病毒的最適感染復(fù)數(shù)(MOI)為20時(shí)，熒光顯微鏡下可以觀察到大部分細(xì)胞發(fā)出綠色熒光。故后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，各細(xì)胞系中加入MOI為20的慢病毒。RealtimePCR法證實(shí)，canstatin基因成功的轉(zhuǎn)入HUVEC，HO8910PM及SKOV3細(xì)胞。M