馬鈴薯卷葉病毒雙鏈RNA干涉載體構建.pdf

1、本研究從感染馬鈴薯卷葉病毒(PLRV)的馬鈴薯葉片中提取出病毒RNA進行cDNA合成并運用RT-PCR技術進行體外擴增，得到了符合理論設計的PCR擴增產(chǎn)物，將這些產(chǎn)物正反向插入到經(jīng)改造的適合轉化馬鈴薯的雙元載體RNA干涉區(qū)，成功構建了馬鈴薯卷葉病毒RNA干涉載體。主要研究結果如下：
　　（1）利用Trizol法直接從感PLRV的馬鈴薯葉片中提取了PLRV總RNA；
　　（2）通過分析馬鈴薯卷葉病毒基因組序列，設計了6對引物。

2、RT-PCR擴增出5對引物的產(chǎn)物，大小分別為240bp、270bp、360bp、380bp、400bp；
　　（3）對質粒載體pFGC5941和pCAMBIA1300重組。重組質粒pCADS1341用EcoRI/PstI酶切鑒定，能夠切出大小為3.5kb和8.9kb的兩條特異性的條帶，證明了適合馬鈴薯轉化的RNA干涉誘導載體構建的正確性；
　?。?）擴增出的片段正反向兩次插入質粒載體pCADS1341，經(jīng)酶切鑒定，得到3個R