1，25（OH）-,2-D-,3-干預(yù)EAT大鼠Th1細(xì)胞活性的研究.pdf

1、目的：慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎(橋本甲狀腺炎，Hashimoto'sthyroditis，HT)屬器官特異性自身免疫性疾病，Th1細(xì)胞活性增強(qiáng)是其發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)?；钚跃S生素D3(1，25(OH)<,2>D<,3>)可在多個(gè)環(huán)節(jié)抑制Th1細(xì)胞及其細(xì)胞因子活性。本研究擬建立Wistar大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)動(dòng)物模型，在不同階段給予1，25(OH)<,2>D<,3>干預(yù)，觀察其對(duì)大鼠EAT的干預(yù)效果，為活性維生素D3在HT的臨床

2、治療中提供理論依據(jù)。 方法： 1．建立大鼠EAT 模型：6-8周齡清潔級(jí)雌性Wistar大鼠分為模型組與正常組，采用豬甲狀腺球白(pTG)+福氏佐劑(FA)從第0周開(kāi)始每周一次皮下注射致敏原100ug/只，直至第8周處死，模型組大鼠給予0.05％碘化鉀(KI)水不限量飲用，正常組大鼠僅皮下注射FA和普通水飲用。模型組大鼠每2周作心臟穿刺取血，用放射免疫法(RIA)作TG-Ab和TM-Ab水平監(jiān)測(cè)。大鼠第8周處死取標(biāo)本，觀

3、察其甲狀腺組織形態(tài)改變，酶聯(lián)免疫放射法(ELISA)檢測(cè)血清IL-4，IFN-γ，IL-10及IL-12水平的變化。 2．1，25(OH)<,2>D<,3>對(duì)EAT 大鼠的干預(yù)：Wistar大鼠隨機(jī)分為8組，其中包括1，25(OH)<,2>D<,3>預(yù)防組A1，A2組，1，25(OH)<,2>D<,3>治療組B1、B2組，陽(yáng)性對(duì)照組C1，C2和陰性對(duì)照D1，D2組。除陰性對(duì)照組外，其余大鼠均給予pTG+FA+KI免疫致敏。1，2

4、5(OH)<,2>D<,3>預(yù)防和治療組每只大鼠使用維生素D<,3> 5ug/kg.2d，分別從建模0～6周和2～8周按不同用藥方法(口服/腹腔注射)進(jìn)行干預(yù)，正常和模型組應(yīng)用消毒花生油用口服及注射作對(duì)照。各組大鼠在第6周或第8周處死，取甲狀腺組織做病理學(xué)檢查，分離血清，RIA檢測(cè)TGAb和TMAb水平，ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子IL-4，IFN-γ，IL-10及IL-12的變化。 結(jié)果： 1．EAT模型建立：從組織形態(tài)學(xué)上

5、觀察，與正常對(duì)照大鼠相比，EAT 模型組大鼠甲狀腺結(jié)構(gòu)不完整，濾泡破壞、萎縮或消失，膠質(zhì)稀少，淋巴細(xì)胞彌漫性浸潤(rùn)，部分位置有纖維化改變。模型組從第2周起 TG-Ab和 TM-Ab濃度開(kāi)始上升，2、4、6、8周抗體水平分別與0周相比較，水平有顯著性升高(P<0.01)，2～8周間抗體水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 2．EAT大鼠體內(nèi)細(xì)胞因子水平變化：IFN-γ、IL-12水平顯著高于正常對(duì)照大鼠，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(P<0.05)

6、。EAT 大鼠血清IL-4、IL-10水平與正常對(duì)照組大鼠相比顯著性降低(P<0.01)。 3．1，25(OH)<,2>D<,3>對(duì)大鼠EAT的預(yù)防效應(yīng)：與對(duì)照組相比，預(yù)防組大鼠甲狀腺結(jié)構(gòu)保持較完整，少量濾泡有萎縮，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯。血清 TG-Ab和 TM-Ab水平與同時(shí)期的陽(yáng)性對(duì)照相比，預(yù)防組大鼠TG-Ab和TM-Ab水平明顯降低(P<0.05)，與陰性對(duì)照無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；預(yù)防組大鼠較陽(yáng)性對(duì)照組IFN-γ及I

7、L-12水平顯著下降(P均<0.01)，IL-4和IL-10水平升高，有顯著性意義(P<0.001)，與陰性對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異。口服組與注射組間組織形態(tài)、抗體水平、因子濃度均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 4．1，25(OH)<,2>D<,3>對(duì)大鼠EAT的治療效應(yīng)：與對(duì)照組相比，治療組EAT。大鼠甲狀腺整體結(jié)構(gòu)完整，大部分濾泡形態(tài)正常，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少。血清TGAb和TMAb水平與同時(shí)期的陽(yáng)性對(duì)照相比，治療組大鼠抗體水平

8、明顯降低(P<0.05)，但較陰性對(duì)照明顯升高(P<0.05)。從細(xì)胞因子來(lái)看，與陽(yáng)性對(duì)照組相比較，治療組IFN-γ及IL-12水平顯著下降(P<0.01和P<0.05)，IL-4和IL-10水平升高，有顯著性意義(P<0.001)。與正常組比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?？诜M與注射組間組織形態(tài)、抗體水平、因子濃度均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1．利用Wistar大鼠建立 EAT 模型是模擬人類自身免

9、疫性甲狀腺炎的較理想動(dòng)物模型，應(yīng)用pTG+CFA皮下注射、加碘劑服用的方法建模，操作方便，結(jié)果較可靠； 2．EAT 大鼠體內(nèi)存在有Th1/Th2失衡，表現(xiàn)TH1型細(xì)胞及因子功能亢進(jìn)，與人類HT免疫失衡相一致； 3．在EAT大鼠建模開(kāi)始就使用1，25(OH)<,2>D<,3>可使EAT大鼠甲狀腺組織保持較完整形態(tài)，維持血清抗體及細(xì)胞因子IFN-γ，IL-4，IL-12及IL-10水平在正常范圍。提示1，25(OH)<,2>