1α，25（OH）-,2-D-,3-與臍血單個核細胞Th2分化相關(guān)性的研究.pdf

1、1α，25(OH)2D3是維生素D的活性形式，以往對其在鈣磷平衡及骨代謝中作用的研究較多，目前發(fā)現(xiàn)它對體內(nèi)的免疫系統(tǒng)也具有重要的調(diào)節(jié)作用。人類的免疫相關(guān)性疾病主要包括以Th1優(yōu)勢為主的自身免疫疾病和Th2亢進的變態(tài)反應性疾病，對1Q，25(0H)2D3在自身免疫性疾病中的作用人們已取得一定的共識，而對其在變態(tài)反應性疾病中的效應研究較少。本課題通過檢測臍血250HD3濃度和1α，25(OH)2D3在體外不同條件下對臍血單個核細胞胞生成細胞

2、因子的影響，探討新生兒出生時的維生素D狀態(tài)和1α，25(OH)2D3對臍血Th細胞分化的作用以及在變態(tài)反應性疾病中所起的作用。 第一部分臍血250HD3與單個核細胞胞內(nèi)細胞因子的水平 目的：了解新生兒的維生素D水平，推測產(chǎn)婦的維生素D儲備狀態(tài)；同時評估新生兒早期的Th細胞極化狀態(tài)。 方法：選取2004年9～10月間在本院分娩的32例新生兒臍血，用放免法檢測血漿250HD3水平。同期，另選9例正常分娩新生兒的臍血，

3、抗凝分離單個核細胞(CBMC)，用流式細胞術(shù)檢測CD4+T細胞產(chǎn)生的IFNY和IL-4比例。 結(jié)果：250HD3檢測值為53．0±24．8nmol／L，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布(p=0．575)。其中正常組(≥40nmol／L)20例，異常組(＜40nmol／L)12例，2例為嚴重低下(≤25nmol／L)。 CBMC內(nèi)CD4+細胞的IFNγ和IL-4檢測結(jié)果顯示，CD4+IFNγ+細胞的比例范圍是O．41～6．45％，CD4+I

4、L-4+細胞的比例范圍是0．08～1．59％。兩組數(shù)值呈正態(tài)分布(p值為0．786和0．908)，兩者無明顯相關(guān)性(r=0．089，p＞0．05)。 結(jié)論：依據(jù)普通成人的標準，從臍血的250HD3水平推測，目前妊娠期維生素D不足的現(xiàn)象仍較為普遍，而維生素D水平低下對妊娠婦女和新生兒都會造成不利影響。由此提示本地對防治維生素D缺乏和相應的監(jiān)測工作存在不足。臍血Th細胞的檢測結(jié)果，提示新生兒出生時的Thl細胞和Th2細胞分化狀態(tài)表現(xiàn)

5、為Th1優(yōu)勢的特征，個體間差異較大，Thl和Th2細胞比例間無明顯相關(guān)性。 第二部分1α，25(OH)2D3對臍血Th1／Th2分化的影響 目的：研究1α，25(OH)2D3在不同條件下，影響臍血Th細胞分化的趨勢。 方法：將分離獲得的9例臍血單個核細胞(CBMC)加入PHA后分為四組，置于四種不同的環(huán)境中培養(yǎng)，包括1α，25(OH)2D3，1α，25(OH)2D3+IL-4和IL-4以及空白培養(yǎng)液。應用流式細胞

6、術(shù)，在不同的培養(yǎng)時間點1天、3天和7天時，檢測CD4+IFN-γ+細胞和CD4+IL-4+比例。比較相同時間不同條件下，1α，25(OH)2D3干預的組間差異和1α，25(OH)2D3干預對細胞分化的影響隨時間的變化趨勢。 結(jié)果：各時間點的檢測結(jié)果顯示，空白組CD4+IFNγ+細胞和CD4+IL-4+細胞比例均逐漸增多。單純1α，25(OH)2D3干預時，與對照組相比CD4+IFNγ+細胞的生成受到抑制，此效應至第3天時更明顯，

7、均值分別為1．12％和6．0％(t=4．998，p＜0．001)，而對CD4+IL-4+細胞比例則起促進作用，均值分別為1．73％和0．92％(t=5．822，p＜0．001)，但這一促進并未呈持續(xù)表現(xiàn)，而是逐漸減弱，至第7天已出現(xiàn)抑制樣的特征(均值分別為0．46％和1．15％，t=5．941，O＜0．001)。同時加入IL-4和1α，25(0H)2D3組，與單加IL-4的對照組相比，IFNγ+細胞的生成也受到抑制，但抑制作用呈減弱趨勢

8、，第7天時呈現(xiàn)促進樣變化，無組間差異(43％和2．5％，t=1．854，p＞0．05)；對生成CD4+IL-4+細胞作用，第1天與對照組相比已呈抑制(1．04％和1．24％，t=2．877，p<0．05)，并且隨作用時間延續(xù)，其抑制作用逐步增強。1α，25(OH)2D3組的3個時間點的各檢測結(jié)果顯示組間方差齊性(p＞0．05)，CD4+IFNγ+細胞和CD4+IL-4+細胞的各自差異有顯著意義(F=8．382和7．932，p＜0．01)

9、。組內(nèi)比較，顯示CD4+IFNγ+細胞的差異隨時間變化有統(tǒng)計學意義(p＜0．01)；CD4+IL-4’的改變第3天起有顯著差異(p＜0．01)。1Qα，25(OH)2D3+IL-4組的結(jié)果方差亦呈齊性(p＞0．05)，CD4+IFNY’細胞和CD4+IL-4+細胞的各自差異顯著(F=5．178和7．162，p=0．014和0．004)。組內(nèi)比較，CD4+IFNγ+細胞和CD4+IL-4+細胞的變化均從第3天有顯著差異(p＜0．01)。