荔枝核提取物對D-半乳糖誘致小鼠學習記憶障礙的改善作用.pdf

1、目的:
　　探討荔枝核提取物(Litchi Seed Aqueous Extracts,LSAE)是否具有改善D-半乳糖誘致小鼠學習記憶障礙的作用,并研究其可能的作用機制。
　　方法:
　　2月齡昆明種小鼠50只,體重20±2g,雌雄各半,分為空白對照組(Normal,10只)和造模組(40只),造模組小鼠連續(xù)8w皮下注射D-半乳糖(500mg·kg-1·d-1)建立小鼠學習記憶障礙模型,空白對照組皮下注射等量生理鹽水

2、。第5周起造模組小鼠按體重隨機分為:模型組(Model,10只)、石杉堿甲組(huperzine A,HU,10只,0.4mg·kg-1·d-1)、荔枝核提取物高劑量組(LSAE H,10只,60g·kg-1·d-1)、荔枝核低劑量組(LSAE L,10只,15g·kg-1·d-1),給藥組連續(xù)灌胃相應劑量藥物4w,同時空白對照組和模型組均灌胃等量蒸餾水(10ml·kg-1·d-1)。第8周起,采用自主活動儀和Morris水迷宮測試小鼠

3、自主活動及學習記憶能力;采用化學比色法檢測小鼠血清中超氧化物歧化酶活力(SOD)、谷胱甘肽-過氧化物酶活力(GSH-Px)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-丙二醛(MDA)、糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)的含量,腦勻漿中一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶活力(NOS),乙酰膽堿(Ach)含量、乙酰膽堿酯酶(AchE)活力;采用流式細胞儀(flow cytometer,FCM)測定腦細胞線粒體膜電位;免疫組化法測腦組織海馬區(qū)AGEs沉積、Aβ沉積;RT-PC

4、R法檢測腦組織bcl-2mRNA、baxmRNA的表達和β淀粉樣前體蛋白(β-APP)mRNA的表達;采用透射電鏡方法觀察小鼠腦海馬線粒體形態(tài)結構的改變。
　　結果:
　　(1)與空白對照組小鼠相比,模型組小鼠的自主活動明顯減弱,表現(xiàn)為白天和夜間平均速度變慢(p<0.05,p<0.01)、白天和夜間休息時間率增加(p<0.01,p<0.01)、白天和夜間快運動時間率減少(p<0.01,p<0.01)、白天慢運動時間率增加(p

5、<0.05);學習記憶能力明顯下降,表現(xiàn)為Morris水迷宮實驗逃避潛伏期明顯延長(p<0.01)、原象限停留時間明顯縮短(p<0.01)、站臺穿越次數(shù)明顯減少(p<0.01);
　　(2)與空白對照組小鼠相比,模型組小鼠血清SOD和GSH-Px活力明顯下降(P<0.01,P<0.01)、MDA含量明顯升高(P<0.01),AGEs含量明顯升高(p<0.05);腦勻漿NO含量明顯增加(p<0.05)、NOS活力明顯提高(p<0.0

6、5),Ach含量明顯減少(p<0.05)、AchE活力明顯增高(p<0.05);線粒體膜電位明顯下降(p<0.05);bcl-2mRNA表達水平下降(p<0.01),baxmRNA表達水平明顯上升(p<0.01);β-APP mRNA表達水平上升(p<0.05);海馬區(qū)AGEs沉積、Aβ沉積明顯增多;海馬神經(jīng)元線粒體數(shù)目減少,腫脹,線粒體嵴模糊、變短甚至消失,基質(zhì)減少,外膜破裂,空泡樣變;
　　(3)與模型組小鼠比較,LSAE高、

7、低劑量組小鼠白天休息時間率減少(p<0.01,p<0.01),白天快運動時間率增加(p<0.01,p<0.01);LSAE低劑量組小鼠夜晚平均速度增加(p<0.05),夜晚快運動時間率增加(p<0.05); LSAE高、低劑量組小鼠Morris水迷宮實驗縮短逃避潛伏期縮短(p<0.05,p<0.01);
　　(4)與模型組小鼠比較,LSAE高、低劑量組小鼠血清中 SOD活性提高(p<0.01,p<0.01),GSH-Px活性提高(

8、p<0.01,p<0.01),LSAE低劑量組小鼠MDA含量減少(p<0.01),LSAE高劑量組小鼠血清AGEs減少(p<0.05);
　　(5)與模型組小鼠比較,LSAE高、低劑量組小鼠腦組織NO含量降低(p<0.05,p<0.05)、NOS活性下降(p<0.05,p<0.05);
　　(6)與模型組小鼠比較,LSAE高劑量組小鼠腦細胞線粒體膜電位提高(p<0.05);
　　(7)與模型組小鼠比較,LSAE高、低劑

9、量組小鼠腦細胞bcl-2mRNA的表達提高(p<0.05,p<0.05),baxmRNA的表達降低(p<0.01,p<0.05),LSAE低劑量組小鼠β-APPmRNA的表達降低(p<0.05);
　　(8)與模型組小鼠比較,LSAE高、低劑量組小鼠腦海馬AGEs、Aβ沉積減少,海馬細胞內(nèi)線粒體的超微結構基本恢復到正常。
　　結論:
　　LSAE對D-半乳糖誘致的小鼠學習記憶障礙模型的Morris水迷宮學習記憶活動具有