基因突變?cè)诮Y(jié)直腸癌中的生物學(xué)意義及西妥昔單抗療效預(yù)測因子的分析研究.pdf

1、結(jié)直腸癌（colorectalcancer,CRC）是最常見的惡性腫瘤之一，隨著人們平均壽命的提高，生存環(huán)境及生活方式的改變，近年來CRC的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，在發(fā)達(dá)國家及我國經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)，CRC的發(fā)病率已上升至惡性腫瘤的第二位。全球每年新增病例約一百萬，約五十萬患者因其死亡，CRC已經(jīng)成為全球惡性腫瘤導(dǎo)致死亡的主要原因之一。
　　隨著對(duì)CRC病因?qū)W的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)CRC的發(fā)生是多階段、多因素累積作用的結(jié)果，其中基因突變

2、和分子信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常激活和CRC的形成及發(fā)展密切相關(guān)。研究表明，表皮生長因子受體（EGFR）所介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)通路的活化是CRC發(fā)生、浸襲和轉(zhuǎn)移的主要危險(xiǎn)因素之一。EGFR是一種跨膜的酪氨酸激酶受體，在多種實(shí)體瘤中均有表達(dá)，EGFR與配體結(jié)合活化激活的下游信號(hào)傳導(dǎo)通路主要有兩條：一條是RAS/RAF/MAPK，另一條是PI3K/AKT。在過去的十年中，針對(duì)EGFR的靶向治療顯著地改善了晚期CRC患者的治療效果，開創(chuàng)了靶向治療的新時(shí)代。西妥

3、昔單抗（Cetuximab,Erbitux,C225,愛必妥）做為抗EGFR單克隆抗體的代表性藥物，在復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的晚期CRC患者的一線及二線治療中均顯示了較好的療效。隨著靶向治療發(fā)展，廣大學(xué)者發(fā)現(xiàn)C225僅適用于KRAS野生型的CRC患者，KRAS基因的突變狀態(tài)已經(jīng)成為預(yù)測單抗療效的重要生物學(xué)標(biāo)志物。但在實(shí)際的臨床應(yīng)用中，仍有部分KRAS野生型的CRC患者C225治療無效，一定存在其它影響單抗療效的生物學(xué)因素?，F(xiàn)有的研究雖表明了基因突變

4、在CRC中的作用，但關(guān)于基因突變與CRC患者臨床病理指標(biāo)之間關(guān)系的報(bào)道卻較少，并且除KRAS外現(xiàn)仍無公認(rèn)的生物學(xué)標(biāo)志物來預(yù)測C225的療效，所以仍需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究來探討基因突變?cè)贑RC中的生物學(xué)意義，并迫切的需要發(fā)現(xiàn)新的生物學(xué)標(biāo)志來預(yù)測單抗的療效，推動(dòng)CRC分子靶向治療的發(fā)展。
　　本課題收集我院2008-2009年入院治療的200例CRC患者的癌組織標(biāo)本，以CRC中EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路為靶點(diǎn)，聯(lián)合檢測并分析KRAS、BRAF和

5、PIK3CA突變與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系，探討基因突變?cè)贑RC發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義，為腫瘤的診斷、判斷生物學(xué)行為及預(yù)后提供更可靠的依據(jù)。另外收集我院行C225治療的CRC患者的臨床資料及癌組織標(biāo)本，聯(lián)合檢測KRAS、BRAF、PIK3CA突變和PTEN的表達(dá)，并對(duì)每一例患者進(jìn)行療效評(píng)估及嚴(yán)格隨訪，根據(jù)檢測、評(píng)估及隨訪的結(jié)果，期望能發(fā)現(xiàn)新的生物學(xué)標(biāo)記物來預(yù)測C225療效，為臨床的應(yīng)用提供指導(dǎo)，具有一定的臨床意義。
　　在本研究中

6、，我們分別從200例癌組織石蠟標(biāo)本中提取DNA，行PCR擴(kuò)增后采用焦磷酸測序技術(shù)，檢測KRAS、BRAF和PIK3CA的突變率，統(tǒng)計(jì)分析基因突變與臨床病理之間的關(guān)系（包括：患者的年齡、性別、腫瘤位置、Dukes’分期、TNM分期、組織病理學(xué)分型及轉(zhuǎn)移）。研究發(fā)現(xiàn)焦磷酸測序技術(shù)是一種切實(shí)可靠的測序技術(shù)，其靈敏程度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它測序方法。在200例患者中KRAS突變率為31.5％（63/200），其中12密碼子突變率為26％（52/200）

7、，13密碼子突變率為5％（10/200），12和13密碼子雙突變率為0.5％（1/200）。BRAF突變率為7％（14/200），PIK3CA突變突變率為12.5％（25/200），其中9號(hào)外顯子突變率為6％（12/200），20號(hào)外顯子突變率為6.5％（13/200），結(jié)果表明中西方人群中，CRC患者的KRAS、BRAF和PIK3CA的突變率無明顯差別，KRAS和BRAF的突變是相互排斥的、在同一患者中不可同時(shí)存在，而KRAS和PIK

8、3CA的突變卻可以同時(shí)發(fā)生。此外結(jié)合患者的臨床資料，我們發(fā)現(xiàn)KRAS、BRAF和PIK3CA的突變與CRC患者的年齡、性別、腫瘤位置、組織病理學(xué)分型之間無明顯的關(guān)系。然而KRAS和PIK3CA的突變與患者的Dukes’分期之間的關(guān)系密切，相比之下，BRAF的突變和Dukes’分期無明顯的關(guān)聯(lián)。PIK3CA的突變好發(fā)生于Dukes’D期的KRAS突變型的CRC患者，說明KRAS和PIK3CA雙突變和CRC的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，尤其是和肝臟轉(zhuǎn)移密切相

9、關(guān)。KRAS和PIK3CA的突變可能成為判斷CRC患者轉(zhuǎn)歸和預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物。
　　此外我們對(duì)C225治療的KRAS野生型CRC患者進(jìn)行療效評(píng)估及隨訪，并檢測了每例患者BRAF、PIK3CA基因的突變，并采用免疫組織化學(xué)染色檢測PTEN在癌及癌旁組織中的表達(dá)情況。結(jié)果表明PTEN主要表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)，在癌組織中表達(dá)降低或缺失，在正常組織中表達(dá)正常，并且PTEN的表達(dá)和西妥昔單抗的療效密切相關(guān)，在我們的研究中PTEN表達(dá)陽性及陰性患

10、者的反應(yīng)率（CR+PR）分別為（42.9％，36.4％，P<0.05），說明PTEN表達(dá)缺失患者的療效較差，PTEN可能成為單抗療效的預(yù)測因子。此外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：KRAS、BRAF及PIK3CA基因均為野生型的患者對(duì)單抗治療的反應(yīng)率為62.5％（CR+PR），而存在BRAF及PIK3CA突變患者的反應(yīng)率分別為（0％，28.6％），證實(shí)了BRAF及PIK3CA的突變可顯著影響C225的療效，BRAF、PIK3CA和PTEN可做為C225療

11、效的預(yù)測因子。
　　總結(jié)上述結(jié)果，我們可以得出下列結(jié)論：KRAS和PIK3CA基因的雙突變與CRC的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，KRAS和PIK3CA的突變可能成為判斷CRC患者轉(zhuǎn)歸和預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物，此外BRAF、PIK3CA的突變和PTEN的表達(dá)缺失可以顯著影響C225的療效。對(duì)上述結(jié)論的深入研究，可以使我們更加深刻地認(rèn)識(shí)到基因突變?cè)贑RC中的生物學(xué)意義，幫助臨床醫(yī)生對(duì)每位患者的轉(zhuǎn)歸及預(yù)后做出正確的判斷，并推動(dòng)以靶向治療為基礎(chǔ)的CRC