TGF-β1調(diào)控頭頸鱗癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化及其侵襲的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究表明,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesenchymaltransition,EMT)在上皮源性腫瘤轉(zhuǎn)移中起著十分重要的作用。近年來(lái),EMT在頭頸鱗癌中也得到證實(shí),但其形成的分子機(jī)制并不十分清楚。由于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)調(diào)控多種腫瘤EMT形成并與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān),成為研究的重點(diǎn),本研究應(yīng)用TGF-β1刺激頭頸鱗癌細(xì)胞,觀察刺激后細(xì)胞EMT相關(guān)表現(xiàn)及其侵襲情況,并進(jìn)一步探討相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：⑴不

2、同濃度TGF-β1刺激頭頸鱗癌細(xì)胞Tu686后,MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況；⑵不同濃度TGF-β1刺激頭頸鱗癌細(xì)胞Tu686后,于不同時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞形態(tài)變化,RT-PCR及Western-blot檢測(cè)上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin表達(dá)情況,同時(shí)檢測(cè)TGF-β1信號(hào)通路中Smad2、p-Smad2表達(dá)情況；⑶劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)比較TGF-β1刺激前后Tu686細(xì)胞遷移及侵襲潛能的

3、變化；⑷用siRNA沉默Smad2后,Western-blot檢測(cè)EMT標(biāo)志蛋白E-cadherin表達(dá)水平,Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)比較Tu686細(xì)胞侵襲能力的改變。
　　 結(jié)果：①TGF-β1對(duì)頭頸鱗癌細(xì)胞Tu686生長(zhǎng)增殖無(wú)顯著影響；②TGF-β1刺激后,Tu686細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變,表現(xiàn)為細(xì)胞間松散,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,有偽足形成；③TGF-β1刺激后,Tu686細(xì)胞上皮性標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)下調(diào),而間質(zhì)性標(biāo)

4、志物Vimentin表達(dá)增強(qiáng),且具有濃度和時(shí)間依賴性；同時(shí)檢測(cè)到p-Smad2表達(dá)也增強(qiáng),而Smad2表達(dá)基本不變；④TGF-β1刺激后,Tu686細(xì)胞細(xì)胞遷移及侵襲潛能較對(duì)照組明顯增強(qiáng)；⑤Smad2 siRNA干擾后,Tu686細(xì)胞上皮性標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)增強(qiáng),細(xì)胞侵襲潛能降低。
　　 結(jié)論：⑴TGF-β1對(duì)頭頸鱗癌細(xì)胞Tu686生長(zhǎng)增殖無(wú)顯著影響；⑵TGF-β1能誘導(dǎo)頭頸鱗癌細(xì)胞株Tu686發(fā)生EMT改變,并同時(shí)