農(nóng)桿菌介導(dǎo)水稻RdreB1BI基因轉(zhuǎn)化草莓的研究.pdf

1、草莓(Fragaria ananassa Duch)屬于薔薇科草莓屬多年生草本植物，是一種重要的經(jīng)濟(jì)漿果，在世界范圍內(nèi)廣泛種植.然而草莓安全越冬和耐寒品種的缺乏成為生產(chǎn)上的突出問題.生物技術(shù)的飛速發(fā)展為解決這一問題提供了新的途徑，水稻轉(zhuǎn)錄因子RdreBIBI是一個(gè)到目前為止還未見有RdreBIBI基因轉(zhuǎn)化草莓的研究.因調(diào)控植物發(fā)育且與植物脅迫抗性相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子.已有研究證明將RdreBIBI基因轉(zhuǎn)化擬南芥，擬南芥植株的抗早性和耐寒性有很

2、大提高。此本試驗(yàn)?zāi)康氖怯酶┺r(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法將水稻RdreBIBI基因?qū)氩葺?xì)胞，獲得抗寒的轉(zhuǎn)基因植株.主要研究結(jié)果有以下幾點(diǎn)： 1.以草莓‘豐香’、‘雪蜜’、‘鬼怒甘’的葉片和葉柄為外植體，建立了高效離體再生體系.‘豐香’葉片和葉柄的最佳不定芽再生培養(yǎng)基為：MS+TDZ(2.0mg/L)+IBA(0.2mg/L)+2，4-D(O.lmg/L)和MS+B5+TDZ(2.0mg/L)+IBA(0.2mg/L)+2，4-D(0

3、.1mg/L).‘雪蜜’葉片和葉柄的最佳不定芽再生培養(yǎng)基為：MS+TDZ(1.5mg/L)+IBA(0.2mg/L)和MS+B5+TDZ(2.0mg/L)+IBA(0.2mg/L).‘鬼怒甘’葉片和葉柄的最佳不定芽再生培養(yǎng)基為：MS+BA(2.0mg/L)+IBA(0.1mg/L)和MS+BA(2.0mg/L)+IBA(0.1mg/L)；‘豐香’、‘雪蜜’暗培養(yǎng)時(shí)間為14天，‘鬼怒甘’暗培養(yǎng)時(shí)間為7天；‘豐香’、‘鬼怒甘’葉片不定芽再生

4、的最佳葉齡為10-30天，‘雪蜜’葉片不定芽再生的最佳葉齡為20天以下.三個(gè)草莓品種葉柄不定芽再生的最佳葉齡都是20天以下；葉片放置方式對三個(gè)草莓品種的葉片不定芽再生沒有影響，葉柄刻傷向上放置有利于三個(gè)草莓品種葉柄不定芽再生。 2.克隆了rd29A啟動(dòng)子，通過對比分析，與已公布的序列有98.72％的同源性，主要調(diào)控區(qū)域也一致，構(gòu)建了兩個(gè)植物表達(dá)載體pYH4215-rd29A和pYF7713-Rdre。 3.通過研究影響遺

5、傳轉(zhuǎn)化的因素，建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的‘雪蜜’草莓遺傳轉(zhuǎn)化體系：菌液濃度為OD600-0.4；侵染時(shí)間為9min；選用200mg/L的Cb作為抑菌抗生素，20mg/L的Kan作為篩選抗生素；共培養(yǎng)時(shí)間3天；共培養(yǎng)培養(yǎng)基：MS+TD2(2。0mg/L)+IBA(0.2 mg/L)；篩選培養(yǎng)基：MS+TD2(2.0mg/L)+IBA(0.2mg/L)+Kan(20mg/L)+Cb(200mg/L)；伸長培養(yǎng)基：MS+6-BA(0.5mg/L)+N