小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物學特性和分子分型研究.pdf

1、[研究背景]
　　 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（Yersinia enterocolitica）是一種革蘭氏陰性無芽孢桿菌，屬于耶爾森菌屬，是該菌屬的三大致病菌之一。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌廣泛存在于自然環(huán)境中，主要通過污染食物進入人體。人感染小腸結(jié)腸炎耶爾森菌后，主要表現(xiàn)為胃腸道癥狀，如嘔吐、腹痛、腹瀉等，多具有自限性。但是，部分患者可出現(xiàn)一系列嚴重的并發(fā)癥，如心內(nèi)膜炎、反應性關節(jié)炎、組織膿腫等，甚至引起敗血癥導致死亡。在歐洲，由該菌和假結(jié)

2、核耶爾森菌引起的耶氏菌病在常見的人畜共患病中占第四位;在美國，由該菌引起的疾病每年發(fā)病約11.7萬例;在我國，文獻可查的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌暴發(fā)有兩次。該菌可分為6個生物型(1A，1B和2～5)和60個血清型，主要通過檢測ail、ystA、ystB、yadA和virF5個毒力基因來判斷其致病性。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌對青霉素和一代頭孢天然耐藥，對其他種類的抗菌藥物具有不同程度的耐藥率。脈沖場凝膠電泳(Pulsed Field GelElect

3、rophoresis，PFGE)分型是現(xiàn)階段小腸結(jié)腸炎耶爾森菌分子分型最常用的方法，主要用于菌株的溯源。
　　 山東省自2006年開始，設立高密市和五蓮縣兩個監(jiān)測點對小腸結(jié)腸炎耶爾森菌開展監(jiān)測，至2011年共從雞、牛、羊、豬等動物糞便和生熟肉、蒼蠅中分離到小腸結(jié)腸炎耶爾森菌237株。這些菌株的動力、生物型、血清型、毒力基因和抗菌藥物敏感性等生物學特性尚缺乏系統(tǒng)性的研究分析，分子分型也尚未開展。
　　 [研究目的]

4、　　 1、系統(tǒng)分析分離到的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的動力、生物型、血清型、毒力基因和抗菌藥物敏感性等生物學特性及其時間、地區(qū)和宿主分布特點。
　　 2、對分離到的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌進行PFGE分型，了解菌株的親緣關系，探討表型分型和PFGE分型的相互關系。
　　 3、初步建立山東省小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的基礎數(shù)據(jù)庫，為該菌的長期監(jiān)測奠定基礎，為耶氏菌病的預測、預警提供技術支持。
　　 [研究方法]
　　 1、動力

5、試驗采用半固體穿刺法，生物分型根據(jù)生化反應進行判斷，血清分型采用玻片凝集法，毒力基因檢測采用PCR法，抗菌藥物敏感性檢測采用VITEK2 COMPACT系統(tǒng)和AST-GN16藥敏卡。
　　 2、PFGE分型參照PulseNet China推薦的標準方法進行，電泳圖譜處理及聚類分析采用BioNumerics6.1軟件。
　　 3、資料的錄入、整理和簡單分析采用Excel2007軟件，數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析采用SPSS16.0軟件

6、。
　　 [研究結(jié)果]
　　 1、動力為“中”的菌株占4.2％(10/237)，動力為“差”的菌株占3.0％(7/237)，其余菌株動力良好。動力為“中”或“差”的菌株在各年份、各地區(qū)和多種宿主中均有分布。
　　 2、98.7％(234/237)的菌株為生物1A型;其余3株菌為生物4型，均從2006年高密市的豬糞樣本中分離到。
　　 3、49.8％(118/237)的菌株凝出相應血清型，以O∶5(21.9

7、％，52/237)和O∶8(21.1％，50/237)型為主。2011年可分血清型最多（5種）;高密分離株O∶5型最多(23.9％，39/163)，五蓮分離株O∶8型最多(33.8％，25/74);各宿主分離株均以O∶5和O∶8型為主。
　　 4、ystB基因的陽性率最高，為81.4％(193/237); ail和ystA基因僅在3株菌中檢測到，陽性率為1.3％(3/237);未檢測到y(tǒng)adA和virF基因。ystB基因陽性菌株

8、在不同時間、地區(qū)和宿主中均為優(yōu)勢菌株。
　　 5、共有235株菌獲得抗菌藥物敏感性試驗的結(jié)果。菌株對頭孢曲松、頭孢吡肟、阿米卡星、慶大霉素和替加環(huán)素的敏感率最高，為100％;對氨芐西林的耐藥率最高，為94.5％(222/235)。菌株的多重耐藥率為12.3％(29/235)。2007和2011年分離株對呋喃妥因的敏感情況有差異(P＜0.05);高密市分離株對復方新諾明的耐藥率(10.4％，17/163)高于五蓮縣分離株(1.4％

9、，1/72)(P＜0.05);毒力基因A型（ail-ystAystB+yadA-virF-）菌株對氨芐西林、阿莫西林-克拉維酸、頭孢唑林、頭孢西丁的耐藥率和對呋喃妥因的中介耐藥率(依次為99.0％，190/192;89.6％,172/192;94.8％,182/192;80.2％,154/192;94.8％,182/192)高于毒力基因B型（ail-ystA-ystB-yadA-virF）菌株(依次為72.5％，29/40;65.0％，

10、26/40;67.5％,27/40;42.5％,17/40;65.0％,26/40)(P＜0.05)。
　　 6、237株菌中的231株被分為144個PFGE型別，相似性系數(shù)在61.1％～100.0％，無明顯優(yōu)勢型別。五蓮分離株的PFGE聚集性高于高密分離株，含7株及以上菌株的PFGE型別均出現(xiàn)在五蓮縣。其余6株菌未獲得PFGE條帶。144個PFGE型別中有15個型別在中國疾控中心數(shù)據(jù)庫中可找到相同或相近的型別。
　　

11、7、17株動力為“中”或“差”的菌株中的14株形成3個聚類簇;52株O∶5血清型菌株中的31株形成4個聚類簇，50株O∶8血清型菌株中的19株形成1個聚類簇;41株毒力基因B型（ail-ystA-ystB--yadA-vir-）菌株中的20株形成1個聚類簇;藥敏型別在PFGE聚類中分布分散，無特異性。
　　 8、動力、生物分型、血清分型、毒力基因分型、藥敏分型和PFGE分型的Simpson指數(shù)分別為0.1362、0.0251、0

12、.6564、0.3081、0.7214和0.9982。
　　 [結(jié)論]
　　 1、高密市和五蓮縣的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌存在動力突變株;菌株幾乎全為生物1A型;血清型以O∶5和O∶8型為主，存在地區(qū)差異;菌株攜帶的毒力基因主要為ystB基因，無傳統(tǒng)致病性菌株;耐藥譜廣泛，大部分菌株對青霉素類和一、二代頭孢耐藥，存在一定的多重耐藥現(xiàn)象，ystB基因陽性的生物1A型菌株與ystB基因陰性的生物1A型菌株耐藥性不同。