先天性巨結(jié)腸小腸結(jié)腸炎腸道菌群研究及臨床危險因素分析.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用Illumina高通量測序技術(shù)研究先天性巨結(jié)腸（HD）與先天性巨結(jié)腸小腸結(jié)腸炎（HAEC），及其與HAEC緩解期（HAEC-R）患兒腸道菌群組成差異。此外，回顧性探究HAEC反復(fù)發(fā)作的臨床非手術(shù)影響因素。
　　方法：
　　研究第一部分入組2例HD和2例HAEC患兒，于手術(shù)中采集不同腸道部位的內(nèi)容物并編號，共采集13個樣本，其中HD樣本5個，HAEC樣本8個。研究第二部分入組5例HD，5例HAEC及3例H

2、AEC-R患兒，術(shù)中采集不同腸道部位的內(nèi)容物并編號，共35個樣本，其中HD，HAEC和HAEC-R組樣本數(shù)分別為12，17和6個。實驗室步驟：均使用PowerSoil DNA isolation kit試劑盒提取樣本微生物總DNA，采用引物515F和806R對16S rRNA V4區(qū)基因片段進(jìn)行擴(kuò)增，應(yīng)用Illumina Miseq平臺測序，采用RDP classifier貝葉斯算法對OTU代表序列進(jìn)行分類學(xué)分析，并在門綱目科屬水平分析

3、各組患兒腸道菌群群豐度以及構(gòu)成，利用QIIME計算Alpha多樣性和Beta多樣性。利用LDA Effect Size分析（Linear discriminant analysis coupled with effect size measurements，LefSe）比較各組間微生物群落差異。此外，回顧性分析67例接受巨結(jié)腸根治術(shù)患兒的臨床資料，將入組患兒分為三組，腸炎反復(fù)發(fā)作組：小腸結(jié)腸炎發(fā)作≥3次者；腸炎組：發(fā)作1-2次者；無腸炎

4、組：未發(fā)生腸炎者。應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析HAEC反復(fù)發(fā)作的7個非手術(shù)影響因素，包括患兒性別，根治術(shù)年齡，病變類型，術(shù)前有無營養(yǎng)不良、低白蛋白血癥、小腸結(jié)腸炎、上呼吸道或肺部感染。
　　結(jié)果：
　　研究發(fā)現(xiàn)，在門綱目科屬各水平上，HD組與HAEC組患兒的腸道菌群組成存在顯著差異（P<0.05），而HAEC-R組腸道菌群模式類似于HAEC組（P>0.05）。Alpha多樣性和Beta多樣性分析顯示，腸道近遠(yuǎn)端腸道菌群無

5、統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。Beta多樣性分析顯示，每個HD患兒不同腸道部位的腸道菌群模式不同，并保持其各自部位應(yīng)有的特點(diǎn)（P<0.05），而每個HAEC及HAEC-R患兒不同腸道部位的腸道菌群模式極其相似，失去了各自部位原有的菌群特點(diǎn)（P>0.05）。此外，回顧性分析HAEC反復(fù)發(fā)作臨床危險因素的研究中，F(xiàn)isher精確檢驗結(jié)果顯示，三組間性別和根治術(shù)年齡均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；腸炎反復(fù)發(fā)作組患兒的病變類型，低白蛋白血癥發(fā)生率

6、與腸炎組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；腸炎反復(fù)發(fā)作組術(shù)前營養(yǎng)不良，小腸結(jié)腸炎，上呼吸道或肺部感染發(fā)生率與腸炎組相比均存在統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），而腸炎組與無腸炎組無統(tǒng)計學(xué)差別（P>0.05）。多因素Logistic回歸分析顯示，術(shù)前營養(yǎng)不良，術(shù)前小腸結(jié)腸炎為小腸結(jié)腸炎反復(fù)發(fā)作的危險因素（OR=9.000,95%CI=1.355-59.783;OR=8.667,95%CI=1.526-49.220）。
　　結(jié)論：
　

7、　HD組與HAEC組患兒的腸道菌群組成存在顯著差異，而HAEC-R組腸道菌群組成類似于HAEC組，提示 HD患兒發(fā)生腸炎后其腸道菌群模式發(fā)生改變，且腸炎癥狀緩解后其腸道菌群模式并未恢復(fù)至無腸炎狀態(tài)，故HAEC發(fā)生及其反復(fù)發(fā)作可能是由于腸道菌群模式改變且持續(xù)存在。同時，有無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并不是影響腸道菌群組成的主要決定因素；而有無特定腸道致病菌的定植可能是影響HAEC發(fā)生的重要原因。此外，HAEC反復(fù)發(fā)作與性別，根治術(shù)年齡，病變類型，低白蛋白