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1、目的: 以多巴胺能神經(jīng)元PC12細(xì)胞作為靶細(xì)胞,觀察氯化錳作用后,對(duì)細(xì)胞增殖及凋亡的影響,并檢測(cè)其凋亡相關(guān)基因Hsp70、Survivin、Bc1-2和Bax表達(dá)情況,以探討氯化錳致PC12細(xì)胞凋亡作用的分子機(jī)理。 方法: 體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞,氯化錳作用后,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及形態(tài)學(xué)變化;MTT比色試驗(yàn)檢測(cè)PC12細(xì)胞的增殖情況,篩選錳的毒作用劑量譜:流式細(xì)胞術(shù)(FCM)及DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PC1
2、2細(xì)胞凋亡;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)PC12細(xì)胞Hsp70、Survivin、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)情況及定位。 結(jié)果: 氯化錳處理24 h后PC12細(xì)胞形態(tài)明顯改變。氯化錳能抑制PC12細(xì)胞的增殖,呈時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系,400 umol/L氯化錳作用48小時(shí),PC12細(xì)胞的增殖抑制率為58.4%。氯化錳能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)顯示氯化錳誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡呈劑量依賴性,各染毒組與對(duì)照組比較差異有顯著性
3、(P<0.01);DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示DNA Ladder。氯化錳作用后,細(xì)胞Bax蛋白的表達(dá)呈劑量依賴性增強(qiáng),且與PC12細(xì)胞凋亡之間呈正相關(guān)關(guān)系(R1=0.972,P<0.01);細(xì)胞Hsp70、Survivin、Bcl-2蛋白的表達(dá)呈劑量依賴性下調(diào),且與PC12細(xì)胞凋亡之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(R2=-0.990,R3=-0.976,R4=-0.980,P均<0.01)。 結(jié)論: 氯化錳作用于PC12細(xì)胞一定時(shí)間后,能
4、明顯抑制其增殖,并呈時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系;氯化錳作用于PC12細(xì)胞24h后,能誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡,并呈劑量依賴性;在氯化錳的作用下,PC12細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)呈劑量依賴性增高,且與PC12細(xì)胞凋亡有正相關(guān)關(guān)系;Hsp70、Survivin、Bc1-2蛋白的表達(dá)呈劑量依賴性降低,且與PC12細(xì)胞凋亡有負(fù)相關(guān)關(guān)系。所以,氯化錳誘導(dǎo)PC12細(xì)胞發(fā)生凋亡可能是多個(gè)凋亡調(diào)控基因共同參與的結(jié)果:可能是通過上調(diào)促凋亡基因Bax,下調(diào)凋亡抑制基因Bc1-
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